分子生物学实验课的复习提纲及答案.docVIP

PCR的原理、PCR反应的主要组分、反应过程分哪几个阶段？影响PCR反应的关键因素？PCR的应用？ 原理： 参考王镜岩《生化》 PCR技术的基本原理 模仿DNA的天然复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的方法，从而获得指数式增长的同一序列DNA。该技术首先让DNA变性，两条链解开；然后使引物模板退火，两者碱基配对；DNA聚合酶以4种dNTP为原料在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。重复此过程，DNA以指数方式扩增。 扩增公式 Y=（1+X）n Y 为产量 ，X为扩增效率 ， n为循环次数 组分： DNA模板(template)，4种dNTP，10× PCR缓冲液(buffer): 组分如下: 15mmol/L MgCl2 500mmol/LKCl 100mmol/L Tris.HCl (pH8.3) 0.1%明胶 引物(primer)（上游引物（M13 F），下游引物（M13 R）），Taq DNA聚合酶 (Taq polymerase) 反应过程： 1.DNA变性（90-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA 　　2.退火（复性）（25-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 　　3.延伸（68-75℃）：在Taq酶（在72左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，