黑角舞蛾核多角体病毒基因体的研究与生物制剂的开发-南台科技大学.pdfVIP

黑角舞蛾核多角體病毒基因體的研究與生物製劑的開發 黑角舞蛾 （Lymantria xylina ）為雜食性森林害蟲 ，其危害之植物在63種以上 ， 而且包括9種果樹 ，以往危害沿海防風林，近來有危害山地果樹之趨勢 ，其寄主植物 種類與危害地區有逐年擴增之現象 （Chao et al., 1996）。雖然此蛾每年皆有區域性 危害報導，然而未受到相當的重視，主要因素為其發生時間短 （3月上旬至7月 ）， 一年一世代。但雌蛾繁殖力強(趙等., 2001) ，因此對此蛾的防治應未雨綢繆 。目前防 治黑角舞蛾仍以化學藥劑為主 張與翁（ ，1985），雖然目前化學藥劑仍有立竿見影的 防治效果，但是化學藥劑也同時殺害大量的天敵 ，破壞了生態的平衡 。長期而言 ， 仍避免不了黑角舞蛾的大發生 ，甚至引起其他害蟲的猖獗。我們對黑角舞蛾的潛在 威脅，應該儘快開發生物防治之有效策略 。 1991年大陸發現黑角舞蛾核多角體病毒(Xia, 1991) ，台灣在近年來也陸續發現 此核多角體病毒廣泛的存在黑角舞蛾族群中，而且更進一步成功建立體外增殖系統 （猶等 ，1997）。因此 ，本研究將要探討廣泛存在黑角舞蛾族群中的核多角體病毒之 致死效率 ；並希望利用體外增殖系統篩選出致病性高且在體外增殖系統能夠量產之 病毒株 ，作為日後防治之生物製劑 。此外，病毒在野外容易受到日光破壞而失去活 性。因此 ，在生物製劑這個部分我們也探討以木質素 （lignin ）衍生物做為紫外線保 護劑 ，提升昆蟲桿狀病毒製劑穩定性的效果 。 本研究第一年成果可歸納成以下六項 ： 1.黑角舞蛾核多角體病毒感染吉普賽蛾細胞之觀察 國立台灣大學王重雄老師由罹病的黑角舞蛾幼蟲體內純化出黑角舞蛾核多角體 病毒 ，經感染吉普賽蛾細胞株 IPLB-LD652Y 後 ，建立兩株體外培養病毒株分別稱 為 N81及 G 。我們獲贈此兩株病毒來研究其感染IPLB-LD652Y的效果 。試驗 結果 發現 N81及 G感染 IPLB-LD652Y細胞株之後 ，第三天才發現少數的細胞具有封埋 體 ，至第七天後才發現有細胞細胞崩解現象發生 ，第十天甚至十四天後細胞崩解現 象更形嚴重 。記錄過程中亦發現 N81 產生的封埋體比G 病毒株來的多，在細胞內繁 衍出來的病毒 ，大多數屬於寡多角體病毒(每個細胞含多角體個數在10個以下 ；few polyhedra FP)只有少數為繁多角體病毒 (multiple polyhedra MP) 。N81 病毒株介於寡 及繁多角體病毒 ，G 病毒株則屬於寡多角體病毒 圖一（ ）。 2.核多角體蛋白基因之聚合酵素連鎖反應 分別取AcMNPV及野生型 LyxyNPV 以及N81 與G 之核多角體病毒DNA 為模 板 ，（Chou et al., ，1996 ）利用一段能增幅核多角體病毒之核多角體蛋白基因片段之 引子進行聚合酵素連鎖反應 ，結果發現四種病毒經 PCR反應後之產物大小皆為為 680bp ，與猶等在1997 年發表LyxyNPV 與AcMNPV 之文獻相符 ，。此外，野生型 LyxyNPV 與AcMNPV 之產物經過BamHI酵素作用後 ，原本 680bp的 PCR 產物會 被切割為 540 與140bp 兩種片段，但是另外兩株 N81 與G 之核多角體病毒的 PCR 產物並不會被BamHI酵素切動 圖二（ ~三）。 3.LyxyNPV限制酶圖譜