第13章生化刘建华.pptVIP

图13.26 乙酰胆碱和突触示意图。 乙酰胆碱受体是受体-门控通道。这类通道不受膜电位控制，而受相应的配体控制。乙酰胆碱与通道蛋白结合后，通道短暂开放。 Torpedo marmorata的电器官是进行乙酰胆碱受体研究的良好资源。这种器官有非常丰富的乙酰胆碱受体，密度达到 ~ 20000 mm-2。加入非离子型去污剂将膜蛋白溶解，然后用共价交联了cobratoxin（从蛇分离的、与乙酰胆碱受体亲和力很高的小蛋白质）的柱子进行亲和层析，纯化乙酰胆碱受体。经分析鉴定，证实乙酰胆碱受体是五聚体，分别是a2, b, g和d。蛋白质分子质量是268 kD。这四种亚基跨膜亚基排列成环，构成跨膜通道。 Torpedo marmorata (也称为electric ray)有一种电器官富含乙酰胆碱受体。 随后克隆这些亚基(50 ~ 58 kD)的cDNAs并测定了它们的核苷酸序列，结果显示这些亚基有明显的序列相似性。这四个亚基a,b, g和d来自同一祖先基因，经过基因重复和差异化形成的。每个亚基有一个很大的胞外结构域。胞外结构域的C-端是跨过脂质双层膜的疏水区域。乙酰胆碱结合于a-g和a-d的界面。用电子显微镜观测纯化的乙酰胆碱受体，结果显示该蛋白约呈五重对称。这种结构与这种蛋白质的五个组成亚基均相似的情况一致（图13.27）。 图13.27 乙酰胆碱受体的结构。每个亚基有一个大的胞外结构域(该结构域主要是b-链)，四个跨膜a-螺旋，和一个处于胞内的a-螺旋。侧面观测(A)，胞外向模孔观测(B)。 通道开放的基础： 直接比较通道在封闭和开放状态下的结构可以回答这个问题。但是没有相应的结构。冷冻电子显微图谱(cryoelectron micrographs)显示乙酰胆碱与胞外结构域结合导致蛋白结构改变，这种改变启动排列在膜上的a-螺旋发生旋转。跨膜a-螺旋的氨基酸序列显示，螺旋中有小的极性或中性（丝、苏、甘）和大的非极性（亮、异亮、苯丙）氨基酸构成交替的脊(ridges)。在封闭状态，大的氨基酸残基占据通道，形成一种压得很紧的疏水环。实际上，每个亚基在关键位置有一个Leu。乙酰胆碱与受体蛋白结合，可能导致膜蛋白别构旋转跨膜螺旋的排列，使小氨基酸残基的侧链排列在孔道内。此时孔道较大、极性更大，适于Na+和K+通过。 图13.28 乙酰胆碱受体的开放。电子显微重构的乙酰胆碱受体结构截面图。左边是封闭型，右边是开放型(与图13.27的结构一致)。M1, M2, M3, 和M4表示每个亚基的四个跨膜a-螺旋。与乙酰胆碱受体结合后冰冻20ms观测通道蛋白开放的结构(截面图)。开放状态M2螺旋沿着亚基的长轴旋转了15度,通道变大。 动作电位将几种离子通道活性整合 配体-门控通道与离子门控通道如何联合作用产生一种精细的生理应答？ 平衡电位（equilibrium potential) ：假定膜将两种溶液分开，而这两种溶液含有不同浓度的阳离子X+ 。假定[X+]in和[X+]out不同，离子通道开放允许X+跨膜移动，则X+会从浓度高的一侧(A)向浓度低的一侧(B)转移。若有其它电荷的一种静电作用力阻止这种浓度差异驱动的离子移动，在某一时刻两种作用达到平衡。平衡状态的电位可以用能斯特（Nernst equation)方程表述： Veq = -(RT/zF)ln([X+]in/[X+]out) = -2.303(RT/zF)log10([X+]in/[X+]out) 其中R是气体常数，F是法拉利常数，z是离子X所带的电荷（如+1表示X+)。 图13.29 平衡电位。当离子浓度梯度驱动离子移动的力与电荷形成的反作用力相等时，膜电位达到平衡。 处于平衡状态的膜电位称为平衡电位。例如，[Na+]胞内 = 14 mM, [Na+]胞外 = 143 mM, 在37℃的平衡电位是+62 mV。类似地，[K+]胞内 = 157 mM, [K+]胞外 = 4 mM, 平衡电位是 - 98 mV。没有刺激，神经元静止状态的膜电位是 - 60 mV。这个数值接近于K+的平衡电位，因为少量的K+离子通道处于开放状态。 现在考虑产生动作电位时出现的情况。 起先，相邻细胞释放乙酰胆碱。乙酰胆碱与受体结合，离子通道开放，但时间不超过1毫秒。乙酰胆碱受体构成的离子通道允许Na+和K+通过，Na+流入细胞，K+流出细胞。若没有其它事情发生，膜电位就降至Na+和K+平衡电位的平均值，即- 20 mV。 当膜电位达到 - 40 mV时，Na+通道的电压感应划桨拉入膜，Na+通道开放。此时Na+迅速