(土壤环境分析)土壤总氮测定——半微量凯氏法.ppt

土壤总氮测定——半微量凯氏法 目的和要求 1.学习凯氏定氮法的原理。 2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含氮量的测定、未知样品的消化蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。 实验原理 土壤、天然有机物（如蛋白质、核酸及氨其酸等）等的含氮量用凯氏定氮法来测定。 当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，分解出氮、二氧化碳及水。氮转变出的氨与硫酸化合生成硫酸铵。分解反应进行得很慢，可加入硫酸铜及硫酸钾或硫酸钠促进之，其中硫酸铜为催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。 消化完了后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解，放出氨。用水蒸汽蒸馏法，将氨蒸入过量标准无机酸溶液中，然后用标准碱溶液进行滴定，准确测定氨量，从而折算出含氮量。 以甘氨酸为例，该过程的化学反应如下： 测定时常用硼酸溶液收集氨，氨与溶液中的氢离子结全，生成铵离子，使溶液中氢离子浓离降低。然后再用标准强酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止。所用的强酸的当量数即相当于被测样品中氨的当量数。 本法适用的范围为0.2-1.0mg氮。相对误差应小于±2%。 试剂 ①浓硫酸 ②混合加速剂：K2SO4：CuSO4:Se=100：10；1 。即100g K2SO4,,10g CuSO4.5H2O和1gSe粉混合研磨，存于具塞瓶中，消煮时每毫升H2SO4加0.37g加速剂 ④氢氧化钠溶液：400g/L ⑤硼酸吸收液：20g/L，称取20g硼酸溶解于1L热水中，摇匀备用。 ⑥ HCl标准溶液：0.01000mol/L。 ⑦甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶于100ml乙醇中。 主要仪器： 如图，凯氏定氮蒸馏装置。 50mL消化管 50mL容量瓶 分析天平 电炉 小玻璃珠 3mL微量滴定管 烘箱 1000mL蒸馏烧瓶 远红外消煮炉 实验流程 样品消化 蒸馏吸收 滴定 实验流程 1.样品消化 (1)准确称取1g左右的干燥土样作为本实验的样品。 (2)准备2个50ml的凯氏烧瓶，并标号，向第1号烧瓶内各加入土样0.4940g，1ml蒸馏水湿润土样后，加入催化剂（K2SO4-CuSO4·5H2O-Se）1.85g，浓硫酸5mL。注意加样品时应直接送入烧瓶底部，切勿沾于瓶口及瓶颈上。向2号烧瓶加入1ml蒸馏水和与1及2号瓶相同的催化剂和浓硫酸，作为空白对照，测量试剂中可能含有的微量含氮物质，以对样品进行校正。 (3)小心摇匀后，按图安装消化装置，置于电炉上，加曲颈漏斗，在通风橱内加热消化。 (4)消化时先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化、泡沫消失后，加大火力保持瓶内液体微沸，消化至溶液呈蓝绿色透明后，再继续加热微沸1h，取下冷却，用少量无离子将消煮液全部转入蒸馏器内，并用水洗涤开氏瓶4-5次，并入蒸馏器中，混匀备用。同时做试剂空白试验。 2蒸馏、吸收 (1)于150ml锥形瓶中，加入20g.L-1硼酸-指示剂混合液5ml，放在冷凝管末端，管口置于硼酸液面以上3-4cm处。然后向蒸馏室内缓缓加入10mol.L-1NaOH溶液20ml，通入蒸汽蒸馏，待馏出液体积约50ml时。即蒸馏完毕。 (2)待样品和空白消化液均蒸馏完毕后，同时进行滴定。 3.滴定 全部蒸馏完毕后，用0.0100N标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸-指示剂混合液由绿色变回淡紫色，即为滴定终点。记录所用酸标准溶液的体积。 结果计算 式中： V—滴定样品所用盐酸标准溶液体积（ml） V0—滴定空白所用盐酸标准溶液体积（ml) C—0.0100 mol.L-1(HCl)标准溶液浓度。实际上，此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写）； 14—氮原子的摩尔质量(g.mol-1)； 10-3 —将ml换算为L； m—烘干土样的质量（g) ×C（HCl）×14.0 ×10-3 （ ） - = m V0 V 土壤全氮(N)量（g.kg-1) ×103 注意： 蒸馏时实验室中切忌有碱性雾气（如氨），否则将严重地影响实验结果的准确度。 一般应使样品中含氮量为1.0-2.0mg。如果土壤含氮量在2g.kg-1以下，应称土样1g；含氮量在2.0-4.0g.kg-1 ，应称0.5-1.0g；含氮量在4.0 g.kg-1应称土样0.5g 。 “空白”滴定值包括水及氢氧化钠溶液中含有的微量的氨。因些，水质对“空白”滴定值的影响甚大。“消化样品”最后用“消化空白”进行校正计算，“不消化的样品”最后用“不消化的空白”进行校正计算。而且，在实验中，稀释样品的水与“空白”的水应当取自于同一瓶中。 开氏法测定全