遗传学实验课件2-1.pptVIP

二、实验器材 PCR热循环仪、琼脂糖凝胶电泳系统、加样枪、枪头、离心管。 三、材料与试剂 1）DNA模板：0.1ug/ul水稻DNA，使用前用TE缓冲液或ddH2O稀释10倍置于冰中。 2）4种脱氧核苷酸（dNTP）：4倍dNTP，即1mmol/L dNTP 、1mmol/L dATP 、1mmol/L dCTP 、1mmol/L dGTP 、1mmol/L dTTP 。 3） 50nmol/L 引物： ISSR第808号引物：AGAGAGAGAGAGAGAGC ISSR第812号引物：GAGAGAGAGAGAGAGAA 4）2.5U/ul Taq聚合酶 ?? 5）DNA 标记（Marker） ? 6）10X PCR反应缓冲液：含有500mmol/L KCl、100mmol/L HCl(PH9.0)、15mmol/L Mg2Cl、0.1%(W/V)明胶、1%Triton X-100。 ? ?7?）? DNA琼脂糖凝胶电泳全部试剂 四、操作步骤 1）0.5ml Eppendorf管一个，反应总体积20ul,用加样枪按以下顺序分别加入各种试剂： ??? 反应物?????????? 体积（ul） ??? ddH2O??????????? 14.3 ??? 10X buffer?????? ??2 ??? Mg2+ ?????????????1.5 ??? dNTP???????????? 1 ??? primer???????????? 0.5 ??? Taq?????????????? 0.2 ??? DNA模板???????? 0.5 ??? 附4 琼脂糖凝胶电泳检测植物DNA实验 一、实验原理 琼脂糖凝胶电泳法（agarose gel electrophoresis）主要用于分离、鉴定和纯化DNA片段。用溴化乙锭(ethidium bromide,简称EB，诱变致癌物质！)染色，在紫外灯下，凝胶中1ng的DNA即能直接观察到。琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依赖它们的分子量及分子构型。凝胶类型及其浓度对被分离核酸的分子大小的关系重大。 二、实验器材和试剂的配制 1、实验器材：恒压恒流电泳仪、水平板电泳槽、移液器、烧杯、容量瓶、三角瓶、电炉。 2、试剂的配制： 1）电泳缓冲液（10XTBE溶液）：108g Tris，55g硼酸，7.44g EDTA，加双蒸水定容至1000ml，PH8.5，用时稀释10倍。 2）载样缓冲液：溴酚蓝250mg,加双蒸水10ml ，室温下过夜；二甲苯腈蓝250mg，加双蒸水10ml 溶解；蔗糖40g，加双蒸水溶解；合并三溶液，加双蒸水定容至100ml。 三、实验步骤 1、制agarose凝胶：称0.3g agarose，倒入250ml三角瓶中，加1X TBE溶液50ml，水浴加热溶解。冷却至60oC，用移液器加入2ul EB溶液，晃动使混匀。将制胶板两端密封，放上梳子，倒胶，30~60min胶凝固后，拔去梳子。 1）上样：将胶板两端的挡板或胶布移去，把胶板置于电泳槽中，注入1X TBE缓冲液，使电泳缓冲液液面高出胶平面1cm左右。移取载样缓冲液15ul,DNA提取液2ul，混匀后将样品液加入梳孔中。在两端或中央梳孔上加入DNA ladder标记。 2）电泳：接通电泳仪，上样品端接负极。调节电压电流，电压5-10V/cm，电流10~50mA。恒压电泳2小时左右。 3）检测：关闭电泳仪，将电泳后的凝胶置于紫外分析仪上观测。DNA被溴化乙锭染色后在紫外光下呈现金黄色荧光，照相后关闭电源（紫外线对人眼有害，不要久看）。 2) PCR扩增程序，总时间约4小时 ①94 OC预变性5min后进入循环 ②94 OC变性30S ③52 OC复性45S ④72 OC延伸1min ⑤Go to ②,34 cycle ⑥72 OC延伸8min ⑦12 OC Forever ⑧End ??? 3) 琼脂糖凝胶电泳,分析PCR结果。 实验七人类X小体检测  一、实验目的 掌握X小体的玻片标片制作方法，绘制X小体形态特征及所在部位。鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床诊断提供参考。 二、实验原理 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。 一般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条