转基因小麦植株的检测和种植.docVIP

转基因小麦植株的检测和种植 检测的目的：淘汰未转的、沉默的、分离出的阴性植株 种植的方法：按受体品种、株行种植，同时种植对照。 应用的原理：经典遗传学的三大定律 基因的分离定律：位于一个基因座位上的一对等位基因的遗传 则F2的基因型AA：Aa：aa=1：2：1；表现型A＿：aa=3：1 F2中的纯合植株在F3不分离，杂合植株分离（同F2） （后裔鉴定的理论依据） 基因的自由组合：位于不同染色体上的二个基因座位上的二对等位基因的遗传 （同一染色体但距离较远） 则F1: A1a1A2a2 F2： 基因的连锁互换：位于同一条染色体上连锁的二个基因座位上的二对等位基因的遗传 注意事项： 1）小麦2n=AABBDD=42 2) 基因枪转化中，外源基因的整合方式：以多位点随机插入为主。可通过southern来确认。 但多位点插入类型不稳定，后代易出现沉默、分离等现象。 1、转基因当代（T0）植株 T0代植株的遗传组成类似于杂种F1。在姊妹染色体上的同一位置相同的插入几乎不可能。 外源基因的插入可能有：单一位点插入 多位点插入（可看作多个基因座位。不同染色体上概率大） 可通过PCR检测淘汰T0代未转的植株。如：第6株为阳性，记为T6。 T0代植株所结的种子遗传上为T1代。 2、转基因T1代植株 T0代植株，如T6，所结的种子种成株行。（若T0代未检测，可将该株行混合取样检测。） 将T6株行内植株编号，进行PCR检测，以淘汰掉分离出来的阴性植株，如第3、5株为阳性，则记为：T6-3和T6-5。 T1代植株所结的种子遗传上为T2代。即T6-3和T6-5是T1代植株，所结种子已是T2代。 3、转基因T2代植株 T1代不同植株所结的种子种成多个株行，如T6-3和T6-5株行。 分别将T6-3和T6-5株行内的植株编号，进行PCR检测，以淘汰掉分离出来的阴性植株，并对T6-3和T6-5进行后裔鉴定。 如：T6-3株行内的34株均为阳性，几乎可以断定T6-3为插入位点外源基因纯合类型（也可能多个位点插入，纯阴性植株比例太低）。此时，可（建议分株）检测其外源基因表达情况。 如：T6-5株行内的19、25株为阳性，则记为T6-5-19和T6-5-25。 4、转基因T3代植株 将T6-5-19和T6-5-25所结的种子分行种植，则为T6-5-19和T6-5-25的T3代植株。 分别将T6-5-19和T6-5-25株行内的植株编号，进行PCR检测，以淘汰掉分离出来的阴性植株，并对T6-5-19和T6-5-25进行后裔鉴定。 如：T6-5-25株行内的所有株均为阳性，几乎可以断定为插入位点外源基因纯合类型（也可能多个位点插入，纯阴性植株比例太低）。此时，可（建议分株）检测其外源基因表达情况。 如：T6-5-19株行内的7、13株为阳性，则记为T6-5-19-7和T6-5-19-13。 5、转基因高代植株 将不分离的株系分行种植。可种植多行繁种，以进行个体性状检测，是否达到研究目的。 （这些株行也可能存在外源基因沉默的情况，最好每代检测，否则沉默株比例逐年增加。） 不稳定的株行继续种植检测。 2