慢性砷暴露对小鼠生殖器官ERα、PR mRNA表达的影响 - 副本.pdfVIP

·129· ·基础医学· mRNA 慢性砷暴露对小鼠生殖器官ERct、PR 表达的影响 夏雅娟1,2张峰，孟萌，李建云1都光3 (1．内蒙古地方病防治研究中心，内蒙古呼和浩特010031；2．哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验 室。内蒙古大学实验动物研究中心，内蒙古呼和浩特010021；3．内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特010018) 雌激素及孕激素作为哺乳动物(尤其是雌性动 谱仪(ICP-MS，Elan型，DRC—e一热电)。 物)生殖系统中重要的性激素，它们的细胞作用主 1．2方法 要是诱导转录、合成调节及分化蛋白质，而这一作 1．2．1砷暴露动物模型的建立：小鼠适应性饲养1 用的发挥必须依赖于雌激素、孕激素分别与其受体 周后，按体质量随机分为5组，每组lO只。将A820， 标准储备液用去离子水稀释，按砷暴露浓度分别设 (ER和PR)的结合。砷化物的生殖毒性作用体内外 研究已得到了证实，其毒性机制也有多种学说。有 空白对照组、0．05、0．10、0．20、0．40mg／L组，每天给 研究表明砷具有雌激素样效应。作者的前期体外研 予充足的不同砷浓度的饮水。普通饲料，自由采食。 究也证实了砷的雌激素样效应，使实验动物动情周 饲养室温度控制在(224-3)℃，湿度控制在40％左 期发生紊乱，然而砷化物生殖发育毒性的雌激素样 右。在连续砷暴露20周后剖杀。 效应机制并不清楚。本研究通过测定慢性砷暴露小 1．2．2实验动物组织采取：雌鼠颈椎脱臼处死后迅 lIll无酶 鼠子宫、卵巢ER、PRmRNA的表量达，进而探讨砷速采取子宫、卵巢。将采取的组织放入1．5 的体内雌激素样效应机制及对生殖发育的影响。 离心管．随即将离心管浸入液氮中冻存，备用。经分 1材料与方法 离后的血清用等离子质谱仪(ICP—MS)测定血清中 1．1材料 砷浓度。 1．1．1 1．2．3总RNA的提取及检测、引物的设计与合成、 主要试剂：TaKaRaRNAiso试剂、TAKARA SYBR RT—PCR 实时荧光定量PCR反应：按RNAisoReagent试剂 Dilution，由 PrimerScriptTMKit、Easy 盒提取子宫、卵巢组织总RNA，通过微量分光光度 宝生物工程(大连)有限公司提供；ER、PR及B—actin 引物，由宝生物工程(大连)有限公司合成。 计检测总RNA浓度，完成cDNA的反转录。根据 1．1．2受试物：三氧化二砷(As203)，分析纯(二级)， 5．0设计ER、PR、-acfin 北京化工厂，批号890314。砷标准储备液(1g／L)： 用引物设计软件premier 称取经105℃干燥2h的As203(分析纯)0．1320g 基因的PCR引物，上游引物Pl，下游引物P2，均由 ml溶 宝生物工程(大连)有限公司合成。将反转录后的样 于50“烧杯中，加入NaOH溶液(40g／L)10 解，再加入浓硫酸10IIll．转移至1000ml容量瓶中 品cDNA完成实时荧光定量PCR反应，求出相应基 定容，摇匀。水为去离子水。此溶液浓度为