不同品种龙眼壳、核提取物的抗氧化性的研究.docVIP

不同品种龙眼壳、核的提取物抗氧化性的比较研究 实验目的：了解不同品种龙眼提取物的抗氧化性情况 实验仪器：电子天平、烘干机、旋转蒸发器、紫外分光光度计、微波炉、超声波清洗仪、恒温水浴锅， 实验试剂：50%乙醇、70%乙醇、无水乙醇、维生素C、20%硫酸、1,2-二苯基-2-苦味酰自由基(DPPH·)标准品、Tris-HCI缓冲溶液、25mmoL/L的邻苯三酚溶液、8mol/L的HCl、0.2mol/LpH=7.4的磷酸盐缓冲液、5mmol/L邻二氮菲溶液、7.5mmo1/FeS04溶液、0.02%的H2O2、0.2mol/LpH6.6的磷酸盐缓冲液、1%的K3Fe(CN)6、10%的三氯乙酸溶液、0.1% 的FeCl3、l%FeC13水溶液、2%FeC13-1%KFe(CN)6、10%NaOH、H2SO4、1%AlC13、锌粉+HCl、没食子酸、福林-酚试剂、20%碳酸钠、芦丁标准试剂、30%乙醇、5%NaNO2、10%Al(NO3)3、lmol/L的NaOH溶液 实验方法：提取成熟的不同品种的龙眼壳、核的方法有两种超声波提取法和微波提取法。 微波提取法：先将不同品种的龙眼壳、核烘干后粉碎，然后取不同品种的龙眼壳、核粗粉2g，置100ml三角锥形瓶，加入18ml70%乙醇，静置30min，在微波功率300w的条件下微波辐射90s，然后60℃水浴浸提1h，得到不同品种龙眼壳和核的提取液。 超声波提取法：将龙眼核、壳先烘干，取不同品种的龙眼壳、核粗粉2g，置100ml三角锥形瓶，加入20ml 50% 乙醇，静置30min，50℃超声波提取30min，冷却，滤过，滤液置100ml容量瓶，加水至刻度，摇匀。 将上述两种方法提取出的不同品种龙眼的提取液旋转蒸发回收乙醇，待干燥后计算提取率，选取提取率高的方法用作提取方法。 1、不同品种龙眼壳、核提取物对DPPH自由基清除率的测定 取一支干净的试管,加入不同品种龙眼壳、核的提取液2mL,与2mL0.2mmol/LDPPH.溶液混合均匀,置暗处反应30min后倒入光径为1cm的比色皿中在517nm处测定其吸光度值A同时测定2mL0.2mmol/LDPPH.溶液与等体积无水乙醇混合液的吸光度Ac,以及待测液与等体积无水乙醇混合液的吸光度A0，计算出清除率 清除率(%)= 式中：A为2mlDPPH溶液+2ml样品溶液吸光度；A0为2ml待测溶液+2ml无水乙醇的吸光度(517nm处样品本身的吸光度)；Ac为2mlDPPH溶液+2ml无水乙醇的吸光度。 2、不同品种龙眼壳、核提取物对超氧阴离子清除率的测定 取4.5mLTris-HCI缓冲溶液,于20℃水浴中预热20min,分别加入1mL不同品种的龙眼壳的提取溶液和0.4mL25mmoL/L的邻苯三酚溶液,混匀后,于25℃水浴中反应5min,然后加入8mol/L的HCl溶液lmL终止反应,然后在325nm处测定吸光度A,空白以蒸馏水代替试样液,测定吸光度A0 按下面的公式计算清除率: 清除率(%)= 式中A0为不加样品时吸光值,A为加人样品后测得的吸光值, 3、不同品种龙眼壳、核提取液清除羟基自由基的测定 在试管中分别加入2mLpH=7.4的磷酸盐缓冲液,0.3mL5mmol/L邻二氮菲溶液,充分混匀后,加入0.2mL7.5mmo1/FeS04溶液,每加一管后立即混匀。然后向其中加入不同品种龙眼壳的提取液,混匀,再加入0.02%的H2O21mL,最后补充蒸馏水体积至8mL。另再做损伤管和未损伤管,其中损伤管中加入0.02%的H2O21mL,未损伤管不加H2O2,最后补充各管体积至8mL。于37℃下保温lh,测在51Onm下的吸光值。 A0一未损伤管的吸光值； Al一损伤管的吸光值； A2一加提取液的吸光值 4、不同品种龙眼壳、核提取物的总还原力的测定 取不同品种的龙眼壳提取溶液和维生素C溶液0.5mL,维生素C溶液作对照组，加入0.2mol/LpH6.6的磷酸盐缓冲液和1%的K3Fe(CN)6溶液各2.5mL并混合均匀,混合液50℃保温20min后,快速冷却,加入2.5mL10%的三氯乙酸溶液,混合后以3000r/min离心10min。取上清液2.5mL,加入2.5mL蒸馏水和1mL0.1%的FeCl3,摇匀,10min后700nm下测定吸光值A700。 5、不同品种龙眼壳、核中抗氧化活性物质的初步鉴定 分别试验不同品种龙眼核、壳提取液与l%FeC13水溶液、2%FeC13-1%KFe(CN)6、10%NaOH、H2SO4、1%AIC13和锌粉+HCl反应，观察反应现象。 6、抗氧化物含量的测定(以没食子酸计) 标准曲线的绘制 准确称取0.1250g没食子酸于小烧杯中,用2mL无水乙