酵母种群数量变化.ppt

培养液中酵母菌种群数量的变化 北京川布兰生物技术开发有限公司 实验原理 种群的数量变化有一定的规律，变化的曲线主要分为两种：在理想的状态下，种群呈“J”型增长；在有限的环境下，种群呈“S”型增长。 酵母菌生长周期短，增殖速度快且世代间不重叠，在实验室中用培养液培养酵母菌，可以观察酵母菌种群随时间的变化情况。 实验原理 测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和培养平板计数法。 利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以估算样品中全部的细胞数目。 实验目的 1.探究酵母种群数量随时间增长的变化，从而了解酵母种群数量的动态变化规律。 2.学习使用血球计数板进行酵母细胞计数的方法。 实验用具及材料 1.仪器：显微镜，血球计数板，微量可调移液器，盖玻片，吸水纸。 2.材料：酵母菌种，无菌马铃薯培养液，无菌水。 实验步骤 1.称取马铃薯浸出粉0.1g，蔗糖2g加水定容至100mL，调节pH值至酵母菌生长最适pH4.5~5.0，121℃高压蒸汽灭菌20分钟。 2. 在超净工作台内，用灭过菌的吸头取酵母菌种100μL接种到100mL的马铃薯蔗糖培养基中，放到恒温培养箱中培养，设置温度为25℃，连续培养7天。 实验步骤 3.每天同一时间在超净工作台内取出酵母菌液为样品，把母液放置恒温振荡器中继续培养。用血球计数板计算酵母细菌的数量，平行计数3次，做好记录，连续计数7天。 4.根据记录数据绘制酵母数量变化曲线，横坐标为时间，纵坐标为酵母数量，分析酵母种群在培养液中的变化情况。 结果分析 时间/天 0 1 2 3 4 5 6 7 数量/×106 0.40 2.70 24.02 24.95 26.18 25.88 25.52 23.55 血球计数板的介绍 血球计数板是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞，细菌等一些微小物体的数量，如单位体积细胞的数量；还有就是测量细胞，细菌的长度（需要测微尺进行辅助）。 血球计数板的结构 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面都刻有一个方格网。 血球计数板的结构 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个由横竖双线交叉组成的大方格为计数室，供微生物计数用。记数室的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，体积为0.1mm3。双线组成的的是中格，中格里面又分为若干个小格。 记数室的规格 计数室通常有两种规格：一种是记数室内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是记数室内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种规格，它们都有一个共同的特点，即记数室都是由16×25=25×16=400个小格组成。 计数室的规格 16 （中格）×25 （小格） 25（中格）×16（小格） 血球计数板的使用（计数酵母菌） 用血球计数板计数酵母菌悬液时主要分为以下五个步骤： 计数板镜检——稀释母液——加盖玻片——加样——计数——清洗 一、样品的稀释 样品稀释的便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4~5个酵母细胞为宜。 二、加盖玻片 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 血球计数板的使用（计数酵母菌） 三、加样 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取50μL置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸干，水平静止放置2~3分钟，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。 血球计数板的使用（计数酵母菌） 四、计数 如果使用16×25规格的计数室，要按对角线位，取左上，右上，左下，右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数；如果规格为25×16的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格）的酵母菌数。 血球计数板的使用（计数酵母菌） 带“#”部分为两种规格计数板所需要计数的区域。 血球计数板的使用（计数酵母菌） 注：当遇到位于所需计数的中格线上的酵母菌，一般只计数中方格的上方和左方线上的酵母细胞（或只计数下方和右方线上的酵母细胞）。 血球计数板的使用（计数酵母菌） 对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 计算公式： (1) 16×25的血球计数板计算公式： 酵母细胞数/ml=(100小格内酵母细胞个数/100)×400×104×稀释倍数 (2) 25x16的血球计数板计算公式： 酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数/80)×400×104×稀释倍数 血球计数板的使用（计数酵母菌） 五、清洗 血球汁数板使用后，要及时用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用