[医学]xxxx医院时间分辨-SOP修改.docVIP

山西运城铝厂职工医院检验科 检验项目SOP文件 项目名称： 乙肝病毒表面抗原（定量） 部 门： 免疫室 文件编号: MY- 001 本操作规程编写人:刘俊卿 鱼嘉生 页 码： 第 1页,共 64 页 审批人: 余立民 制定日期： 2007年 3月 25 日 第1版 复审人：余立民 复审日期:2007.03.25 医教科,保管人: 本操作规程每2年复审一次 院档案室,保管人: 检验科主任: 余立民 乙肝病毒表面抗原（定量）测定标准操作规程 1.检验申请 单独检验项目申请:乙肝病毒表面抗原定量测定（缩写HBsAg）。组合项目申请：免疫全套测定中加选本项目。临床医生根据需要提出检验申请。 2.标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用真空采血管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符号。 2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2 标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～8℃）稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭。 2.2.3已完成测试的标本保存完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3 标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛。 2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 方法原理 HBsAg诊断试剂盒（IFMA法）是双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，采用单克隆抗-HBs抗体包被反应板，用铕标记抗-HBs，加入待测样本后，当样本中有HBsAg时，会与包被在板上的单克隆抗体结合成抗-HBs-HBsAg，加入铕标记物抗-HBs-DTTA-Eu后，与已结合在板上的HBsAg联接成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-DTTA-Eu复合物。增强液（β-NTA）将复合物上的Eu3+解离到溶液中,并与增强液中的有效成份形成高荧光强度的螯合物,其荧光强度与样本中的HBsAg浓度成正比。通过测定荧光强度，测定血清样本中的乙型肝炎病毒表面抗原。 4试剂及其他用品 4.1试剂：IFMA法测定乙肝病毒表面抗原试剂盒，由苏州新波生物技术有限公司出品。 4.2试剂盒保存：保存2-8℃，试剂未启封情况下可稳定至标签的失效期。 4.3试剂盒准备：用前应将试剂盒各组分在室温中平衡后再开封启用，即开即用。 4.4试剂盒主要成分：1.阳性对照1瓶（1ml） 2.阴性对照1瓶（1ml） 3.铕标记物1瓶（0.2ml），使用前按需求量做1：100倍稀释 。 4.铕标记稀释液1瓶（20ml） 5.浓缩洗液1瓶（40ml），使用前用去离子水作1：25倍稀释。 6.增强液1瓶（20ml） 7.微孔反应板1块（12*8，包被有抗—HBs的单克隆抗体）。 8.吸头20支 。9.封片3片（封板用）。 10.说明书1份 5校准品与准模式 5.1校准品：与试剂盒配套的标准液。 5.2校准类型和数目：线性模式，12个校准点。 5.3校准周期：校准间隔时间30d。但在：⑴更换试剂批号或出现质控漂移时；⑵重要零件更换后；均须进行一次校准。 5.4校准液重建方法：使用前必须达到室温。 6质控品与室内质控规则 6.1质控品采用由苏州新波生物技术有限公司提供的两个不同水平定值质控血清。 6.2质控液重建方法：使用前必须达到室温。 6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 7.适用仪器 适用时间分辨免疫荧光分析仪（DR-M6601、ul阴性、阳性对照及待测样本,按顺序加入微孔反应条小孔并加贴封片. 8.2微孔反应条在室温下,用振荡仪缓慢振摇孵育1小时。 8.3在第一次孵育结束后,小心将微孔反应条上的封片揭下并弃掉,将微孔反应条放入洗板机吸干各孔并每孔注入洗涤液400ul,再吸干各孔,重复以上洗涤4次,最后一次将微孔反