[医药卫生]PCR的临床应用医院发.pptVIP

临床基因扩增技术的应用 四川省临床检验中心 杜 琼 2012、03 基因扩增技术的应用 该技术在临床上的应用近30年—成熟 应用十分广泛-工、农、法、考古、医学。 在临床方面的应用 内源基因的检测-体内（易感基因） 外源性基因的检测-体外侵入（耐药基因） 基因配型的检测-相似程度（亲子鉴定） 如何利用好PCR技术？ 熟悉PCR技术的基本原理 认识PCR技术的特点 各种检测项目的价值 了解PCR技术的影响因素 理解检测结果的临床意义 基本原理 以DNA为例 （1）DNA变性： （2）降温退火： （3）引物延伸： 原理 第一步 – 加热变性 预处理 第二步 – 引物与靶序列退火 第三步 - 引物延伸 第1个 PCR 循环完成后 – 得到两个拷贝的靶序列 30次循环后靶序列扩增的数量 荧光PCR的原理 PCR技术的特点 灵敏度高 特异性强 快速简便 应用范围广 临床应用 肝炎病毒 优生优育 性病病原体 呼吸道病原体 其他病原体 肝炎病原体检测的意义 HBV、HCV 1、了解肝炎病毒在体内存在的数量。 传染？复制？治疗？ 2、肝功能异常是否由肝炎病毒引起？早 期诊断（窗口期）的感染者。 3、基因分型可选抗病毒药物 。 4、判断药物治疗的效果。 5、进行HBV分子流行病学研究。 传统检测乙肝、丙肝病毒的指标 抗原或者抗体：两对半、前S1、S2、HCV抗原、抗体。 肝功能 其他指标 优生优育指标 HCMV、TOX、RV、HSVI、HSVII 孕期感染ToRCH病原体后，一般以隐性感染为主，无明显症状，不易识别。 引起胎儿感染，导致流产、死胎、死产或胎儿生长迟缓、畸形。 ToRCH抗体的检测：不能分辨感染时间。 不能作为终止妊娠的指标。 无法进行早期诊断。 性病病原体 CT、UU、NGH、 HPV、 TP 人乳头瘤病毒分型（HPV） 人乳头瘤病毒6、11型—尖锐湿疣 人乳头瘤病毒高危型--宫颈癌 梅毒螺旋体（TP） CT、UU、NGH、 HPV、 TP 除NGH可培养外，其余难培养或者不能培养。 即使能培养，所需时间长—48小时↑。 看看这些英年早逝的艺人，她们死于宫颈癌……宫颈癌的知晓率在不断提高。 呼吸道病原体的检测 TB、MP、CP、SARS、H1N1 TB-DNA 可以对结核病人早期诊断 可以鉴别诊断肺结核和肺癌 结核与其他分枝杆菌区分 对含菌量低的标本的分离 TB：抗体-- TB：培养—几天报阴 TB：涂片阳性↓↓ MP、CP：无法培养 MP、CP：抗原抗体检测—交叉反应 其他病原体的检测 EB、HP、EV71、EV、Cox A16 EB：在人群中广泛感染，主要通、过唾液传播，也可经输血传染。 青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多症，发热、咽炎和颈淋巴结肿大。 40岁以上中老年人检测出与鼻咽癌关系 密切 。 慢性疲劳综合症有关 不合格标本带来的后果 检验结果解析 HBV--DNA定量结果 定量测定，测定的是病毒量的“多”或“少”； 结果报告方式： 多少？，多少？具体值？ 举例 例如：试剂盒检测范围是103—108IU/ml,我们测定的阴性结果应报告＜ 103 IU/ml；（无、含量低）。中间值报告具体数据；当含量高于最高检测限时，报告＞108 IU/ml。 （ 108 IU/ml； 109 IU/ml …..） 参考范围? IU/ml与COP/mlD的换算---咨询厂家 3.5E+05 IU/ml----表示一毫升血清中有350，000个HBV病毒微粒。 HBV—DNA的变化 在患者治疗过程中检测HBV—DNA定量，一般认为：其结果相差5倍属正常波动，结果相差降低10倍以上才算治疗有效。 例如1 有一患者治疗前检测HBV-DNA定量为8.8E+06 IU/ml，治疗一月后复查为2.3E+07 IU/ml，两结果相差2.6倍。（不一定是高了？） 如何向病人解释： 属正常波动或者检测误差（允许误差） 例如2 一患者治疗前检测HBV-DNA定量为9.2E+06 IU/ml；治疗一月后复查为2.8E+06 IU/ml，两结果相差3.3倍，不能说明治疗有效，需要继续观察。要有明显的下降趋势。 PCR技术的新认识 ?PCR?技术诞生以来，应用广泛，同