[医药卫生]第4章 抗体制药一.pptVIP

第四章抗体制药;名词与概念; 天然免疫(natural immunity)是正常机体具有的天然防御机制，又称非特异性免疫 (nonspecific immunity)。包括生理屏障、淋巴组织中的各类吞噬细胞、天然杀伤细胞 (natural killer cells, NK)等参与的过程； 获得性免疫(acquired immunity)：特异性外源抗原(antigen)对机体的刺激导致的特异性免疫反应，包括由淋巴T细胞和细胞因子介导的细胞免疫(cellular immunity)和淋巴B细胞产生的抗体(antibody)介导的体液免疫(humoral immunity)。;外源抗原;抗原(antigens)：与任何抗体分子特异性结合的物质。 所有的生物分子都可以做为抗原，但只有大分子抗原可以刺激淋巴细胞产生抗体。 能诱导机体产生抗体的分子被称为免疫原(immunogenes) 免疫原诱导产生抗体的能力称为免疫原性(immunogenicity) 抗原分子与特异性抗体结合的部分被称为抗原决定簇(determinants);免疫总览;第一节 概述; 20世纪60年代发现多发??骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白，统称为免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。; 抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 ; 多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 ; 1975年K?hler and Milstein等首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。;; 单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用与疾病的诊断和治疗。 单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。;第二节 单克隆抗体及其制备; 单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。 有的抗原可以用化学合成：地高辛 多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。;1975年，英国剑桥大学的 Kohler and Milstein 成功采用细胞融合技术，使小鼠的脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞 (hybridoma cells)，利用骨髓瘤细胞无限增殖能力，定向产生只作用于某一抗原决定簇的McAb，这就是著名的杂交瘤技术(hybridoma technique)，被称为免疫学的一场革命。;对小鼠免疫，刺激抗体产生;第二节 单克隆抗体及其制备一、抗原于动物免疫①;体内免疫法 选择18-20周龄的雌鼠；选择抗原量较多、且抗原的免疫原性强的免疫原。 ① 颗粒性抗原 (细菌、细胞) 107个细胞，向小鼠腹部注射；间隔1-3周，追加免疫1-2次。 ② 可溶性抗原10-100 ?g/只，加弗氏完全佐剂*，注射，间隔2-4周，追加不加佐剂的抗原1-2次。 ③ 采集细胞前最后一次静脉注射抗原。 *弗氏完全佐剂 Freund’s Complete Adjuvant：在乳化油中悬浮被杀死的、干制的分枝杆菌-人结核杆菌或“卡介苗” (Mycobacterium butyricum)细胞。与抗原混合注射到动物皮下，抗原会缓慢而均匀地被释放出来，诱发动物免疫系统高效而均一地产生抗体。;第二节 单克隆抗体及其制备一、抗原于动物免疫③;第二节 单克隆抗体及其制备二、细胞融合于杂交瘤的选择 ①;杂交瘤细胞的筛选 融合处理后，混合溶液中可以产生5种细胞： 脾-脾、瘤-瘤、脾-瘤三种融合细胞， 脾、瘤两种非融合细胞。 必须使用“HAT选择”才能把其中的脾-瘤融合细胞 (杂交瘤细胞)筛选出来。 什么是“HAT选择”？;HAT选择的基本原理与杂交瘤的筛选;;第二节 单克隆抗体及其制备二、细胞融合于杂交瘤的选择 ③;;第二节 单克隆抗体及其制备三、筛选阳性克隆与克隆化 ①;第二节 单克隆抗体及其制备三、筛选阳性克隆与克隆化 ②;第二节 单克隆抗体及其制备四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定;