立项答辩 -干细胞分化 -srtp.pptVIP

体外大鼠骨髓间充质干细胞在成骨细胞诱导下 向成骨细胞分化的研究 课题意义及主要研究内容 研究思路，实验步骤及方法 具备的研究条件 进度安排及预期结果 创新点 课题意义 1 骨髓间充质干细胞能分化成多种细胞并且具有很强的增殖潜力，所以骨髓间充质干细胞很适合于作为骨组织工程种子细胞，其在骨组织工程中有着很好的应用前景 2 骨髓间充质干细胞应用于骨科疾病的治疗具备潜能，而且具有来源广、取材简便、易于保存、无免疫排斥反应等优点 3 体外培养骨髓间充质干细胞及调控其生长、增殖及定向分化将有助于推动临床修复损伤机制的研究，使临床医师能够阶段性的干预组织材料的修复状况 研究思路 在体外对大鼠骨髓间充质干细胞和成骨细胞的进行分离纯化、细胞培养以及各自特性的研究，具体研究其生长形态、迁徙、粘附以及增殖的情况； Mission 1 考察成骨细胞与骨髓间充质干细胞共培养方法，由于细胞培养环境存在差异，需要找到合适的共培养方法，能使两种细胞存在内在所需的交流； Mission 2 以共培养为基础，以少许成骨细胞为诱导因素，研究骨髓间充质干细胞定向向成骨细胞分化过程及其具体诱导因素和信号调控机制研究。 Mission 3 实验步骤 SD大鼠骨髓 碱性磷酸酶检测 传代培养及纯化 SD大鼠乳鼠颅骨 传代培养及纯化 细胞形态鉴定 细胞表面抗原检测 细胞形态鉴定 实验步骤 SD大鼠乳鼠颅骨 干细胞成 骨化鉴定 共培养 SD大鼠骨髓 使用共培养装置 直接共培养 创新点 目前对干细胞在化学药物、物理方法、细胞因子等作用下进行分化的研究较多，直接采用成骨细胞自身诱导骨髓间充质干细胞定向分化相关研究还较少 本研究将设计合适的成骨细胞与干细胞共培养方法，方法上具有一定创新 本实验将进一步深入研究了骨髓间充质干细胞定向向成骨细胞分化的诱导率，以及对分化细胞更加精确的检测、增加了实验的准确性 具备的研究条件 本实验将在生物工程学院生物材料与仿生工程中心进行，该课题组从事生物仿生与材料工程研究有十余年的经验 实验室拥有完善的实验设备，如接触角测试仪、红外检测仪、恒温烘箱、荧光分光光度计、倒置荧光显微镜和完整的细胞培养设备；此外，学校还拥有先进的透射电子显微镜（TEM）原子力显微镜(AFM)和各种光谱色谱分析设备等，能很好地满足本实验的需要 2012.9-2013.1 研究骨髓间充质干细胞和成骨细胞共培养的方法 第二阶段 2013.1-2013.3对诱导后的骨髓间充质干细胞进行成骨鉴定，计算诱导率 第三阶段 2012.6-2012.9 分别对骨髓间充质干细胞和成骨细胞进行分离纯化，鉴别，培养，并研究两种细胞的基本性质 第一阶段 2013.3-2013.5 数据整理，补充 试验，研究报告 撰写 第四阶段 项目计划进度 共培养方法 1、单层培养 单层共培养提供了类似体内的复杂而可模拟的微环境, 包括了细胞与细胞间的接触反应和细胞因子的作用, 是目前应用最广泛的培养方法。但是单层共培养不能区分判断出细胞因子及细胞与细胞间接触反应对于干细胞分化的重要性 2.分层渗透培养 分层渗透培养中两种细胞在同一培养皿中共培养,但由一层多孔膜相隔,使得两种细胞间只存在弥散因子的移动交换,而没有直接接触。这种方 法通常用于研究干细胞分化过程中,排除细胞与细胞接触影响后细胞因子所起的作用 悬浮培养 细胞团块培养 细胞层培养 三维细胞支架培养 3.其他共培养方法 成骨化鉴定 计数诱导1～ 8 d 各组M SCs 的数量并绘制细胞生长曲线 分别在4d, 7d, 10d时检测各组M SCs 的碱性磷酸酶活性 2周时检测诱导M SCs 骨钙素mRNA 的表达水平，能否形成矿化结节及表面标志I型胶原 找到合适的骨髓充质干细胞和成骨细胞共培养的方法 鉴别结果的展示（照片，实物） 完成诱导的骨髓间充质干细胞的多项指标的成骨鉴定 预期结果