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第二节 动物细胞培养反应器 * * 动物细胞工程的成果 多莉 人耳鼠 口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、α及β干扰素、凝血因子Ⅷ和Ⅸ、生长激素、免疫球蛋白以及单克隆抗体等。 动物细胞工程的成果 动物细胞培养过程示意图 放入二氧化碳培养箱中培养 微生物与动植物细胞的比较（P47—Table3-4） 动物细胞体外培养的类型 （1）悬浮培养，指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，可采用微生物的方法在培养基中悬浮培养。来源于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞（包括杂交瘤细胞）和许多重组细胞都属于此类细胞。由于是悬浮生长，细胞密度一般都较高，易于大规模生产，便于过程的控制。 （2）贴壁培养，指必须贴附在固体介质表面上生长的细胞培养，主要适用于贴壁依赖型细胞（亦称贴附型细胞），大多数动物细胞都属于这一类型。这类细胞生长需要附着于某些带适量正电荷的固体和半固体表面，细胞贴附生长后，不再是原有的形态，形态上一般单一化，主要有成纤维细胞型、上皮型、游走型和多形型等。 动物培养反应器的发展 ★ 70年代以来，细胞培养用生物反应器用很大的发展，种类越来越多，规模越来越大，但是反应器的主要结构形式仍以搅拌式、气升式和固定床为主。 ★ 在国外，Celltech公司建立了10000L规模的生物反应器，培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体； ★ Sumitomo公司建立了8000L搅拌反应器生产病毒疫苗、干扰素和其它生物制品； ★ 我国在“七五”期间已经开始这方面的研究，已成功地研制了CellCul－20Ａ等细胞培养用生物反应器。 一、动物悬浮培养生物反应器 剪切力对动物细胞的影响 （1）动物细胞无细胞壁对剪切力非常敏感，又因其细胞尺寸大更容易受到剪切作用的影响。因此如何克服剪切力已是动物细胞大规模培养的一个重要问题。 （2）动物细胞可分为两类，即贴壁依赖性的和非贴壁依赖性两种。剪切力对两种细胞的破坏机制不同，对前者，剪切的破坏作用主要是由点到面小的湍流旋涡作用及载体与载体间、载体与桨及反应器壁的碰撞造成的。对于后者则主要是因为气泡的破碎造成的。 经过改进后的常规发酵罐也可用于动物细胞的悬浮培养，其关键是改进搅拌桨和通气装置。通常采用螺旋桨搅拌器取代圆盘涡轮式搅拌器，以减少搅拌的剪切力。 ● 罐内液体流动温和均匀，产生剪切力小，对细胞损伤较小；? ● 可直接喷射空气供氧，因而氧传递率较高；? ● 液体循环量大，细胞和养分都能均匀分布于培养液中；? ● 结构简单，利于密封并降低了造价。? 常用的气升式反应器有三种：内循环式气升式、外循环式气升式、内外循环式气升式生物反应器。?  动物细胞培养气升式生物反应器的优点 二、动物贴壁培养生物反应器 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 滚瓶培养 中空纤维管生物反应器 (hollow-fiber bioreactor) 中空纤维细胞反应器主体是由微孔中空纤维管束组成的，纤维束由外壳包裹，因此可分为壳体空间及管体空间两部分，每部分各有其进出口。一般地说，细胞生长在壳体部分，新鲜培养液从壳体部分导人，气体在管体部分通过，其中一部分则均匀地扩散至壳体部分 中空纤维培养器的最大缺点： 如果装置因为操作不当而污染杂菌后， 整个装置无法灭菌而报废！！ 三、动物微载体悬浮培养反应器 用微珠作载体，使单层动物细胞生长在微珠表面，可在培养液中进行悬浮培养。 近年来，国外新开发的MC（Microcarrie）主要有： 液体微载体、大孔纤维素微载体、PHEMA微载体、聚苯乙烯孔微载体、聚氨酯泡沫微载体、磁性微载体。其中磁性微载体是由铁、钴或镍的磁性氧化物与经戊二醛处理的明胶混合、研磨，并用水解蛋白酶处理后制成，对疫苗、干扰素、生长素的生产均具有应用潜力，且产品质量较高。 微载体悬浮培养的反应器应解决的关键问题： （1）具有合适的搅拌器。 （2）用扩散方式进行氧的传递。 （3）在培养液中要严格的控制pH值，要求pH控制误 差小于0.05. 　流化床生物反应器的基本原理是培养液通过反应器垂直向上循环流动，不断提供给细胞必要的营养成分，使细胞得以在呈流态化的微粒中生长。同时，不断加入新鲜培养液。这种反应器的传质性能好，并在循环系统中采用膜气体交换器，能快速提供给高密度细胞所需要的氧，同时排出代谢产物；反应器中的液体流速足以使细胞微粒悬浮却不损坏脆弱的细胞。流化床生物反应器满足了高密度细胞培养，使高产量细胞长时间停留在反应器中，优化了细胞生长与产物合成的环境等细胞培养的要求。 流化床生物反应器(fluidizbed bioreactor) 第三节 植物细胞培养反应器 一、植物细胞悬浮培养的特性 （1）植物