质谱在微生物检验方面的应用201512.pdfVIP

广西壮族自治区人民医院检验科 陈杏春 • 质谱背景及基本原理 • 质谱的性能特点 • 质谱在临床微生物检验中的应用 患者男，38岁，再障- 阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征，2014-5-26住院。 入院诊断：口腔及肺部感染，先后使用泰能、稳可信、二性霉素B 、卡泊芬净抗感染， 体温间断波动于38-39℃。 2014-07-26凌晨患者出现高热，寒战，体温40 ℃，胸部不适。查体：贫血外观，皮肤有 散在出血丘疹（葡萄球菌？），口腔上颚有散在溃疡，伴有渗血。10:00 AM抽血培养 (双抽4瓶+真菌瓶)送检。2014-7-30 患者死亡。 A 土曲霉B 黄曲霉C 镰刀菌D 青霉菌 男，21岁，大学生，主因 “胸痛两周，发热4天, 咯血1天。体温最高39.5℃伴 畏寒“就诊。住院检查：WBC: 14 ×109 /L , 中性：84% 。6个月前诊断溃疡 性结肠炎，糖激素治疗6个月（强的松50mg/d，逐渐减量）万古霉素、头孢 米诺、阿奇霉素、拜复乐治疗无效。支气管肺泡灌洗液培养48小时菌落和镜 下 Who are you?! 理想很丰满，现实很骨感… 众里寻它千百度，而它却 在灯火阑珊处 绝 大 多 数 微 生 物 显 示 很 少 的 形 态 学 特 征 ！ • Selective media plating/biochemical tests 生化测试 • Pulsed field gel electrophoresis (PFGE)脉冲场凝胶电泳 • PCR based detection (several) 基于聚合酶技术的检测方法 • Microarrays/FISH hybridization/fluorescence microscopy 核酸探针 • RiboPrinter DNA杂交 • FT-IR 红外光谱 • FAME (fatty acid methyl ester) GC-MS细胞脂肪酸甲基酯 • MALDI-TOF 微生物特征蛋白指纹图谱分析  20世纪80年代，基质辅助激光解析电离技 术(MALDI)的发明使得质谱能够检测生物大 分子  Fox, A ed. 1990. Analytical microbiology methods: chromatography and mass spectrometry.  2009年后微生物质谱技术迅速风靡欧洲、 北美和亚洲的一些国家 二、MALDI-TOF基本原理 Matrix Assisted Laser Desorption/ Ionization – Time Of Flight. 基质辅助激光解吸电离 飞行时间 质谱仪 Matrix - assisted laser desorption/ionization (MALDI) 基质辅助激光解吸电离 三、MALDI Biotyper工作流程 直接涂抹法(direct transfer ) 单一菌种(Pure culture) 90-95% 以上的常规样品 涂抹单一菌落于样品盘上 可于此制备法得到鉴定结果 (Single colony on MALDI )Target 加上 1 μl 基质溶液 (Overlay with 1 μl HCCA Matrix) 质谱图:多数为核糖体蛋白(ribosomal proteins) 信号 ] . 6 u . 0 a . [ . 4 s n 6 e