上原核基因表达调控模式自然选择倾向于保留高效率的生命过程.pptVIP

7. 3. 2 弱化子与前导肽 1、弱化子 在trp mRNA 5’ 端有一个长162bp的mRNA片段被称为前导区，其中123～150位碱基序列如果缺失，trp基因表达可提高6-10倍。mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。这个区域被称为弱化子，该区mRNA可通过自我配对形成茎-环结构。 图7-21 trp弱化子mRNA的终止区 2、前导肽 分析前导序列发现，它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，能产生一个含有14个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽。 在前导序列的第10和第11位上有相邻的两个色氨酸密码子。组氨酸操纵子含有7个相邻的组氨酸密码子，苯丙氨酸操纵子也有7个苯丙氨酸密码子，这些密码子参与了操纵子中的转录弱化机制。 在trp mRNA 5’ 端trpE基因的起始密码前有一个长162bp的mRNA片段被称为前导区，其中123～150位碱基序列若缺失，trp基因表达提高6-10倍。 因为mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录，这是123～150区序列缺失会提高trp基因表达的原因。 由于转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域就被称为弱化子。该区mRNA通过自我配对可以形成茎-环结构，有典型的终止子特点。 3、mRNA前导区的序列分析 trp前导区的碱基序列已经全部测定，引人注目的是其中4个分别以1、2、3和4表示的片段能以两种不同的方式进行碱基配对，有时以1-2和3-4配对，有时只以2-3方式互补配对。 图7-22 原核生物RNA中前导序列变构引起转录的终止或弱化 RNaseT1降解实验（此酶不能水解配对的RNA）表明，纯化的trp前导序列中确有1-2和3-4的配对方式，由此定位的3-4配对区正好位于终止密码子的识别区，当这个区域发生破坏自我配对的碱基突变时有利于转录继续进行。 图7-23 trp操纵子的转录与翻译调控 图7-24 trp操纵子前导序列的变构与转录的弱化 4、转录的弱化作用 培养基中色氨酸浓度低，负载有色氨酸的tRNATrp就少，翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的trp密码子处），前导区2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，有利于转录继续。 培养基中色氨酸浓度高，核糖体顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前就到达2区，3-4区自由配对形成茎-环状终止子结构，转录停止。 所以，弱化子对RNA聚合酶的影响依赖于前导肽翻译中核糖体所处的位置。 7. 3. 3 trp操纵子的其它调控机制 大肠杆菌中共有5个基因参与色氨酸生物合成，构成色氨酸操纵子。其中trpG-D和trpC-F为融合基因，翻译出的多肽具有双重功能。有两个启动子（一个位于操纵子5’，一个位于trpG-D编码区，称为内源启动子）控制整个操纵子的转录。 该操纵子受到由色氨酸激活的阻遏蛋白的调节作用。一旦转录越过前导区，开始结构基因的转录，又会受弱化子的调控，感受无负载的tRNATrp的变化，转录机器在前导区附近停止或者继续转录。 图7-25 B.subtilis和E.coli 色氨酸操纵子的结构比较。 枯草杆菌（Bacillus subtilis）色氨酸操纵子包括6个基因，处于一个12个基因的大操纵子内。B. subtilis还有第7个色氨酸合成基因trpG（又称pabA），位于叶酸操纵子中。 TrpG-PabA多肽链能发挥两个酶的作用，一个用于色氨酸途径，一个用于叶酸途径。 该操纵子也有两个启动子区。RNA聚合酶在任何一个启动子区起始转录都会受到色氨酸和无负载tRNATrp的调控。 图7-26 B. subtilis中色氨酸操纵子的调控机制 在Bacillus subtilis色氨酸操纵子中，色氨酸激活TRAP调节蛋白并使之与前导RNA相结合，形成RNA终止子结构终止转录。而无负载tRNATrp的聚集使TRAP蛋白失活，从而激活转录和翻译。另外，当无负载tRNATrp的浓度升高时，由rtpA基因编码的AT蛋白与TRAP蛋白结合，抑制该蛋白形成转录终止复合物从而激活色氨酸操纵子的转录。 7. 4 其他操纵子 7. 4. 1 半乳糖操纵子 大肠杆菌半乳糖操纵子（galactose operon）在大肠杆菌遗传图上位于17分钟处，包括3个结构基因：异构酶（UDP-galactose-4-epimerase，galE），半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶（galactose transferase，galT），