遗传毒理学2012培训资料.ppt

遗传毒理学;1、遗传毒理学基本概念 2、遗传毒性形成的主要机制 3、遗传毒性后果及其遗传毒理学应用 4、遗传毒理学研究方法;一、基本概念; （一）遗传毒性的类型;;1、基因突变;碱基置换 base substitution;大段损伤 large segment damage;基因突变的分类;2、染色体结构畸变;2、染色体结构畸变;染色体结构畸变的类型;染色体结构畸变类型;染色体结构畸变类型;3、染色体数目改变;4、DNA损伤;二、遗传毒性形成机制;1. DNA损伤机制;(1)碱基类似物(base analogue)的取代;碱基类似物(base analogue)的取代;（2）嵌合剂的致突变作用;（3）转座成分的致突变作用;（4）碱基的化学修饰作用;亚硝基氧化性脱氨; 亚硝基氧化性脱氨;亚硝基氧化性脱氨;羟胺-----胞嘧啶衍生物;烷化剂修饰;（5）DNA加合物和交联分子的形成;参与形成DNA 加合物的活性化学物;;共价结合的位点;共价结合的位点;A;共价结合的位点;形成加合物的后果;形成加合物的后果;形成加合物的后果;形成加合物的后果;（6）异常甲基化作用;5-甲基胞嘧啶（5mC） ;异常甲基化作用;异常甲基化作用;异常甲基化作用;5-甲基胞嘧啶（5mC） ;5-甲基胞嘧啶（5mC） ;5-甲基胞嘧啶（5mC）;（7） DNA的构象改变; （8）增变基因; （9）DNA氧化性损伤;2. DNA损伤与修复;（1）光复活（photoreactivztion）;（2）O6 – 烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶;（3）碱基切除修复（base excision repair, BER）;（3）碱基切除修复（base excision repair, BER）;主要的DNA糖基化酶;主要的DNA糖基化酶;(4)核苷酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）;（5）错配碱基修复（mismatch base repair）;（6）DNA单链和双链断裂的修复;（6）DNA单链和双链断裂的修复;非同源性末端连接（NHEJ）;重组修复;（7）复制后修复（post relication repair ）;（7）复制后修复（post relication repair ）;; 损伤修复与突变;; 细胞周期的关卡作用; 细胞周期的关卡作用;3、不以DNA为靶的作用机制 ;非整倍体和整倍体的诱发;对纺锤体的毒作用;DNA损伤 修复的效率;遗传毒理学的应用;1、诱变剂的检测;3、遗传损伤与疾病;3、遗传损伤与疾病;3、遗传损伤与疾病;3、遗传损伤与疾病;3、遗传损伤与疾病;4、生物标志物（Biomarker）;4、生物标志物（Biomarker）;暴露生物标志物; 效应生物标志物;易感性生物标志物;理想的生物标志物的特征;5、抗突变研究;抗诱变剂分类（作用部位）;抗诱变剂分类（作用部位）;6、易感人群的筛查;7、危险度评定（risk assessment）; 四、遗传毒性检测方法 ;1、遗传学终点;1、遗传学终点;2、试验组合的原则;3、常用的试验方法; 1、基因突变测试;细菌回复突变试验（Ames试验）; 1、基因突变测试;哺乳动物细胞正向突变分析;哺乳动物细胞正向突变分析;哺乳动物细胞正向突变分析; 1、基因突变测试; 转基因动物;转基因动物;2、染色体畸变检测;荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）; 微核试验(micronucleus test);微核试验(micronucleus test);微核试验(micronucleus test);3、DNA损伤标志的检测;（1） 单细胞凝胶电泳;（1）单细胞凝胶电泳;（1）单细胞凝胶电泳;低暴露组：出现拖尾细胞　;（2）γH2AX的检测;（2） γH2AX的检测;（2） γH2AX的检测;DNA加合物常用检测方法比较 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━　　　　　方法　　　　　　　　　灵敏度(加合物/108核苷酸)　每次分析所需DNA量(μg)───────────────────────────────────────── 荧光法　 同步荧光法　　　　　　　3～10　　　　　　　　　　50～1000　　　　　　　 低温激光法　　　　　　　10～100　　　　　　　　　100　　　　　　　 激发－发射荧光法　　　　10～100　　　　　　　　　100 色谱－质谱法 色谱－质谱法　　　　　　 0.1～1　　　　　　　　　 50～2000