根际微生物测定.docVIP

根际微生物种群的测定 ——细菌的测定 一、试剂： 将牛肉青3.0g、蛋白栋1.0g、琼脂粉15.0g放到1000mL水混匀用氢氧化钠调节PH值为7.0，分装于灭菌的三角瓶中，塞上棉塞，高压灭菌备用，用前先将培养基融化，并冷却到45℃。 二、步骤： 称取新鲜土样30.00克放入500毫升的三角锥瓶中，倒入无菌水270mL，然后放在摇床上震荡20分钟，静置5分钟，即制成10-1土壤悬液，随后吸取1毫升上清液放入装有9毫升灭菌水的试管中，吹吸三次使其完全混合均匀，从而制成了10-2土壤悬液，又在该试管中吸取1毫升土壤悬液放入装有9毫升灭菌水的试管中从而制成了10-3土壤悬液，依次类推直到制成10-6土壤悬液然后待用。 在无菌操镜台中摆放好已灭菌的培养皿，用接种针吸取梯度土壤悬液1毫升置于培养皿中央，然后用灭菌量杯量取15毫升培养基倒入培养皿中，转动培养皿，使土壤悬液与培养基完全混合均匀，然后标上接种时间、接种样。培养时间为3天，依据细菌形态特征记下每皿细菌数量。 三、计算： 每克干土含细菌菌数的计算方法：用记录下来的菌落平均数乘以该稀释度的稀释倍数就得到每克鲜土的菌数，按常规方法求出鲜土重和干土重的比值，再折算出每一克干土的菌数： N= a*u*鲜土重/干土重 N：每一克干土的菌数； a：培养皿中的平均菌落数； u：稀释倍数。 根际微生物种群的测定 ——真菌的测定 一、试剂： 将蛋白栋5.0g、琼脂粉20.0g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾1.0g、七水硫酸镁0.5g放到1000mL水混匀分装于灭菌的三角瓶中，塞上棉塞，高压灭菌备用，用前先将培养基融化，并冷却到45℃。 二、实验步骤： 称取新鲜土样30.00克放入500毫升的三角锥瓶中，倒入无菌水270mL，然后放在摇床上震荡20分钟，静置5分钟，即制成10-1土壤悬液，随后吸取1毫升上清液放入装有9毫升灭菌水的试管中，吹吸三次使其完全混合均匀，从而制成了10-2土壤悬液，又在该试管中吸取1毫升土壤悬液放入装有9毫升灭菌水的试管中从而制成了10-3土壤悬液，依次类推直到制成10-6土壤悬液然后待用。 在无菌操镜台中摆放好已灭菌的培养皿，用接种针吸取梯度土壤悬液1毫升置于培养皿中央，然后用灭菌量杯量取15毫升培养基倒入培养皿中，转动培养皿，使土壤悬液与培养基完全混合均匀，然后标上接种时间、接种样。培养时间为5天，依据真菌形态特征记下每皿真菌数量。 三、计算： 每克干土含真菌菌数的计算方法：用记录下来的菌落平均数乘以该稀释度的稀释倍数就得到每克鲜土的菌数，按常规方法求出鲜土重和干土重的比值，再折算出每一克干土的菌数： N= a*u*鲜土重/干土重 N：每一克干土的菌数； a：培养皿中的平均菌落数； u：稀释倍数。 根际微生物的测定 ——放线菌的测定 一、试剂： 将可溶性淀粉10.0g、琼脂粉15.0g、磷酸氢二钾3.0g、七水硫酸镁0.5g、氢氧化钠0.5g、七水硫酸亚铁0.01g放到1000mL水混匀，用氢氧化调节PH值为7.8，分装于灭菌的三角瓶中，塞上棉塞，高压灭菌备用，用前先将培养基融化，并冷却到45℃。 二、实验步骤： 称取新鲜土样30.00克放入500毫升的三角锥瓶中，倒入无菌水270mL，然后放在摇床上震荡20分钟，静置5分钟，即制成10-1土壤悬液，随后吸取1毫升上清液放入装有9毫升灭菌水的试管中，吹吸三次使其完全混合均匀，从而制成了10-2土壤悬液，又在该试管中吸取1毫升土壤悬液放入装有9毫升灭菌水的试管中从而制成了10-3土壤悬液，依次类推直到制成10-6土壤悬液然后待用。 在无菌操镜台中摆放好已灭菌的培养皿，用接种针吸取梯度土壤悬液1mL置于培养皿中央，然后用灭菌量杯量取15毫升培养基倒入培养皿中，转动培养皿，使土壤悬液与培养基完全混合均匀，然后标上接种时间、接种样。培养时间为7---14天，依据放线菌形态特征记下每皿放线菌菌落数量。 三、计算： 每克干土含放线菌数量的计算方法：用记录下来的菌落平均数乘以该稀释度的稀释倍数就得到每克鲜土的菌数，按常规方法求出鲜土重和干土重的比值，再折算出每一克干土的菌数： N= a*u*鲜土重/干土重 N：每一克干土的菌数； a：培养皿中的平均菌落数； u：稀释倍数。