L—总肉碱测定编制说明.docVIP

婴幼儿配方食品和乳粉 L-肉碱的测定编制说明 1、引言 L-肉碱又称肉毒瘤碱或维生素BT,化学式为C7H15O3N,分子量为162.2，化学名L-β-羟基—γ-三甲胺丁酸盐，英文名为L-β-hydroxy-γ-butyrobetaine。类似胆碱和甜菜碱的结构。L-型具有生命活性，作为婴幼儿配方乳粉的成分之一，已在婴幼儿配方食品和乳粉中广泛使用。目前，L-肉碱的检测方法有很多种，有生物法、化学法、酶法、荧光法、HPLC法NMR法和放射酶法。其中以酶法、荧光法和HPLC法较为常用。存在于产品中L-肉碱主要有两种形态：游离态与结合态，它们具有同等的生理作用。所以测定L-肉碱的含量必须包括这两种形态。通过试验认为酶比色法测定婴幼儿配方奶粉中的L-肉碱，具有方法灵敏度高，特异性强等特点。测定结果能反映出样品中L-肉碱的真实状况，所以，在制定本标准时，采用酶比色法。 目前 GB10765-1997、GB10766-1997、GB10767-1997、GB10769-1997等婴幼儿配方奶粉的国家标准中尚未规定L-肉碱的的含量。根据目前此类产品的状况，婴幼儿配方乳粉的配方中，有80%企业都将L-肉碱作为重要指标进行强化，并制定为企业标准。一般强化后样品中的L-肉碱含量在5~50mg/100g范围内。为了适应新形势的发展，我中心与上海英特营养乳品有限公司共同起草了L-肉碱的检验标准。 任务来源 任务来源：国家标准化制修订委员会 任务编号：200794444—T—469 2、制定标准的必要性和意义 L-肉碱有两种光学异构体，即左旋肉碱（L-型）和右旋肉碱（D型）。L-型具有生命活性，而（D型）则是其竞争性抑制剂。而通常所指都是L-肉碱。L-肉碱作为一种功能性营养物质，广泛的存在于自然界中。大多数动物具有合成L-肉碱的能力。L-肉碱主要存在于动物的肝、肾、脑中。 L-肉碱的主要功能是参与动物体内的脂肪代谢。它作为载体将长链脂肪酸从腺粒体膜外输送到膜内，促进脂肪酸的β-氧化，从而促进脂肪的代谢。因此他有如下生理功能： 减少脂肪，降低体重。 在运动时帮助身体燃烧脂肪，提高运动的能量、耐力和运动成绩。 消除过多的乳酸，提高做功能力，促进疲劳的恢复。 增强心细胞氧化脂肪的能力，降低剧烈运动时心脏的负担。 减慢人的衰老过程等等。 根据L-肉碱的上述生物特性，开发了很多功能性食品及药物。如用于减肥、健美等的保健食品、运动员的营养补剂、婴儿食品强化营养剂、中老年人的营养补充剂、饲料添加剂、药物等。 母乳中的L-肉碱含量较高，婴幼儿自身合成L-肉碱的能力较成年人低，所以婴幼儿乳粉中应强化L-肉碱。而L-肉碱作为一种婴幼儿食品添加剂，会因它的合成与提取的方式产生质量上得很大差异，可谓鱼目混杂、良莠不齐。L-肉碱虽然具有多种生理功能，但过高或过低度不能起到应有的作用：过高可能对人体产生危害；过低则起不到其应有的作用。特别是国家自实行食品市场准入制度后，根据有关法规性文件，对产品中添加的所有成分都须达到相应标准的要求，所以，只要在企业标准、或包装标识中规定了L-肉碱含量，都须达到其标准。建立该标准既能为控制产品质量提供依据，也为政府执法提供了必要标准的支持。 3起草过程 3.1 前期工作 L-肉碱在婴幼儿配方乳品的使用已十年之久。在这种情况下，我们开始着手收集相关资料，研究L-肉碱检测技术。先后采用HPLC法与酶比色法进行研究。 研究内容包括样品前处理技术研究、测定技术研究等。样品处理的研究开始主要针对游离态L-肉碱。根据有关资料，采用高氯酸沉淀蛋白质后，滤液用氢氧化钠调节pH至中性进行测定。此种方式处理的样品测定的是游离态的L-肉碱。之后根据国外查找的资料，认为L-肉碱在婴幼儿配方乳粉中约有30%为结合态，并且其生理作用与游离态等同，所以要改进样品处理。我们根据样品的特点及L-肉碱的性质，对样品处理技术重新进行实验研究。经多次实验后认为样品首先用高氯酸沉淀蛋白质后，吸取一定量的滤液用KOH皂化，使结合态L-肉碱变成游离态，然后再用高氯酸调至中性，效果较好。在测定方法上，我们首先开展了采用HPLC法进行测定， 实验结果发现L-肉碱分离度不好， 且响应信号较小，灵敏度低，不能满足测定该类产品中L-肉碱的要求。后采用酶比色法进行实验研究，结果发现该方法选择性好、无干扰、灵敏度较高、易于操作、重现性好等特点。由此确定了样品处理采用KOH皂化提取、酶比色法的测定方法。由于目前无国家标准，据此我们通过全国乳品标准化中心向国家标准化委会提出国家标准制定的申请。 3.2 实验室间验证工作 08年6月28-30日全国乳品标准化中心在青岛组织召开了标准制修订工作会议后，将我们提交的标准文本作了详细的研讨。专家一致认为：此方法对于测定婴幼儿配方食品与乳粉中L-肉碱的含量，方