酵母核糖核酸的提取和组分鉴定.PPTVIP

实验6 酵母核糖核酸的提取和组分鉴定 目的　 学习和掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 原理 从酵母中提取核糖核酸的方法很多。常用苯酚法、去污剂法、盐酸胍法；工业生产上常用的方法主要有稀碱法和浓盐法两种。 酵母中的核酸以RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液。 稀碱法提取制备RNA的原理是利用稀的NaOH溶液，将细胞裂解，RNA溶于碱性提取溶液中，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后通过离心除去菌体等残渣，再将上清液（碱提取液）加入到酸性乙醇溶液中使解聚的RNA沉淀，即得到RNA的粗制品。 核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 器材及试剂 见教材 实验步骤 1、酵母RNA的提取： 将5g酵母悬浮于30ml 0.04 M NaOH溶液中（先加15ml），并在研钵中研磨均匀，将悬浮液转移到150ml锥形瓶中，在沸水上加热30分钟，期间不时搅拌。冷却后转入离心管进行离心。 离心10min（4000rpm）将上清液缓缓倾入（边搅拌）20ml酸性乙醇溶液中，待核糖核酸沉淀完全后，离心3min（4000rpm），弃去上清。用95%乙醇15ml洗涤沉淀，离心3min（4000rpm）弃去上清液，沉淀中加入95%乙醇15ml拌匀，置于布氏漏斗中抽滤，用乙醚洗涤沉淀两次。沉淀在空气中干燥后，即为酵母RNA的粗制品。 2、待测样液的制备： 取适量提取的核酸，加入3N H2SO4 5ml，在沸水浴中加热10分钟后制成水解液并进行组分的鉴定。 3、组分的鉴定： ① 嘌呤碱：取水解液1ml加入过量（1滴管）的浓氨水，然后加1滴管0.1 M AgNO3溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 ② 核糖：取1支试管加入水解液1ml，加FeCl3浓盐酸溶液2滴管和苔黑酚乙醇溶液5滴，放沸水浴中，注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 ③ 磷酸：取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1滴管，在沸水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。 结果与讨论： 1、如何得到高产量RNA的粗制品? * * 布氏漏斗抽滤装置