核酸探针挑选dna分子的提取盐析酶学.ppt

基因工程的原理 大家是否还记得基因的知识？ 基因概念： 基因在染色体上排列特点： 基因的功能： 基因的结构： （三）基因工程的一般程序 2.目的基因的获得 （1）鸟枪法（霰弹法）：核酸探针挑选 3.重组载体的构建 （1）载体的特点 （2）常见载体 （3）构建过程 4.重组载体的导入和筛选 课本第9页 （四）基因工程的意义 打破物种界限，在分子水平上定向改变生物的遗传特性。 * 济南一中 生物组 转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 指按照人们的意愿，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具重新组合，然后转入另一种生物体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。 （一）基因工程的概念 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。 实质（原理） 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，产生人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 一种限制酶只能识别一种特定脱氧核苷酸序列；并在特定切点切割． 一. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （二） 基因工程的基本工具 1、来源： 2、种类： 3、作用： 主要是微生物 4000种。 4、结果： 形成两种末端 粘性末端 平末端 识别序列 SmaI限制酶 ＥcoRI限制酶 －ＣＣＣＧＧＧ－ 切割位点 Ｇ和Ａ之间 Ｃ和Ｇ之间 未端类型 平末端 粘性末端 －ＣＴＴＡＡＧ－ －ＧＧＧＣＣＣ－ －ＧＡＡＴＴＣ－ 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 　被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？ 二个不同的ＤＮＡ的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 被同一种限制切断的几个DNA具有相同的黏性末端。 二. DNA连接酶——“分子缝合针” 1.作用： 把两条ＤＮＡ末端之间的缝隙“缝合”起来 2.DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 三、基因进入受体细胞的载体——”分子运输车” １、作用：将外源基因导入受体细胞 ２、特点（条件） 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 2、有适宜的限制性内切酶酶切位点，最好是对多种限制性内切酶有单一切点 3、具有标记基因，便于进行筛选 4.对受体细胞无害 ３、常用的运载体： 质粒（最常用）、噬菌体和动植物病毒等 1.DNA分子的提取 盐析、酶学、柱层析和超速离心 （2）人工合成目的基因 反转录法：分子量较大而又不知其序列的基因 化学合成法：已知蛋白质的氨基酸序列 转化：含义 筛选方法：选择培养基、核酸探针 方法：植物——农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 动物——显微注射法 5.目的基因的表达和鉴定 检测目的基因表达的产物 “基因的运输车” “基因缝纫针” “基因手术刀” 根据切点不同，分类不同 备注 自我复制 多酶切位点 有标记基因 对受体细胞无害 两种DNA连接酶作用性质稍有差别 专一性 特点 运载目的基因进入受体细胞 连接同一种限制酶的切口 （实质：恢复被限制酶切开的磷酸二酯键） （与DNA聚合酶进行区别） 错位切：产生黏性末端 平切 作用 环状DNA分子（质粒） 蛋白质 蛋白质 化学本质 细菌质粒、噬菌体、动植物病毒等 大肠杆菌、 T4噬菌体 原核生物 来源 载体 DNA连接酶 限制性内切酶 工具 识别特定脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割 （实质：断裂磷酸二酯键） 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） Ａ．同种限制酶 B. 两种限制酶 Ｃ．同种连接酶 D. 两种连接酶 练习 Ａ 注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制