植物除脂脱色处理.doc

植物除脂脱色处理 ·基本原则： 1 植物和蔬菜种类繁多，色素含量、含水量、含糖量和脂肪含量均不尽相同，前处理方法也有差别。 2 含水量75%，脂肪含量2%；含糖量5%，用乙腈提取。比如黄瓜。 3 含水量75%，脂肪含量2%；含糖量5~15%。用乙腈+水共同提取。比如胡萝卜。 4 含糖量15%，用乙腈+水加热共同提取。 5 去色素，florisil+silica gel 共同净化，根据植物所含色素不同，使用florisil+silica gel 不同配比。 ·准备仪器（以三个样为例）： 耗材类：标签纸（7套，以后改进方法时可以考虑减少一套）、脱脂棉、滤膜（双层，6片）。 仪器类：剪刀、榨汁机（双刀片比较快）、药匙、250ml抽滤瓶（小的那种，3个）、布氏漏斗（大小均可，3个）、150ml（或250ml）具塞锥形瓶（可以考虑换为平底瓶）（3个）、500ml分液漏斗（6个）、茄形瓶（6个，可以考虑其中三个换为平底瓶作为第一次装样瓶）、试剂瓶（1个）、玻璃棒（2根，一根搅拌硫酸钠溶液，一根戳棉花）、大瓶子（？）、柱子（3根）、小烧杯（装土），量筒（100ml/1~2个，500ml/1个）、小瓶子（3个，茶色为佳）。 试剂类：乙腈、正己烷、二氯甲烷、florisil土、silica gel、无水硫酸钠、超纯水。 ·前期处理： 1 烧florisil土650℃ 10h，再在140℃活化16h+。用的时候需要去活。 2 烧硅胶450℃ 4h，再在130℃活化16h+。 3 烧Na2SO4 450℃ 4h。 4 烧滤纸、小瓶子,450℃4h。 5 蒸溶剂正己烷、二氯甲烷。 ·基本操作步骤（含注意事项和少量原理）： 1 首先将植物、蔬菜切碎，再用榨汁机打碎。 使用二叶刀片比较快，装满了大概可以弄5~6个样。打碎以后混匀，否则色素不均匀。 植物、蔬菜用水洗，不削皮。搅拌器也用水洗。、 2 称取40g蔬菜浆于150ml（大一点的也可以）具塞锥形瓶（考虑换为平底瓶），用药匙直接装入即可。加入80ml乙腈（如果需要，加水？？加多少？？），加入乙腈的时候将瓶颈上的蔬菜浆冲下去。立即加立即冲比较容易，否则易附着在瓶口，则用塞子弄下。最大速度振摇10分钟。 乙腈是用来脱脂的。这时所测成分溶于乙腈中。脂肪则在另外一相。 3 250ml抽滤瓶抽滤 最好用乙腈洗布氏漏斗和滤膜。因为其他仪器可以烧（烧了吗？），布氏漏斗不能烧。（这里的烧貌似指的是在烘箱里烘干） 如果需要节省，用正己烷洗也可以。 每抽一个样，换一套布氏漏斗和滤纸（滤纸要双层）。 注意先关泵再拔管，否则容易由侧管冲出来。（考虑安一个安全瓶之类的） 考虑用微波 4 转移到500ml分液漏斗（装好以后用正己烷检漏），先加240ml2%的硫酸钠（先加水再加硫酸钠），振摇2分钟，再加40ml正己烷（分两次加，涮洗瓶子，保证全量转移），振摇5分钟。（时间还可以略微调整） Na2SO4水溶液加入后，乙腈和水无限混溶，所以所测成分在这一相中溶解度减小进入正己烷相中（本来不加水的话，正己烷相溶解度还不如乙腈相，加水以后就反过来了）。硫酸钠有防止乳化的作用。 分液漏斗塞子摆放位置要注意，不要弄混。 5 静沉（注意等液面清晰后才开始下一步），分液（先快后慢，慢的时候没有成流），转移上清液到100ml茄形瓶（保证进入100ml茄形瓶的是干净的；茄形瓶可以考虑换为平底瓶，李莉师姐用得就是平底瓶），再萃取一遍。（用40ml正己烷再润一遍瓶子，然后倒入分液漏斗。振摇5min，然后再静沉分液。将上清液转移到原瓶子。） 6 旋蒸到1ml。（在38℃下旋蒸）因为是正己烷所以温度可以比较高。 7 净化1~2g 5%去活florisil（加高纯水在小烧杯里去活，加水以后立即用药匙搅拌）和10g硅胶，再加1cm的无水硫酸钠，干法装柱（比较方便，但是容易出气泡，湿法前期慢，但是不容易出气泡，走柱子也比较快）。（注意先加硅胶再加土，因为florisil土是去色素的，在上层就将其除去，硅胶层除去其他杂质。）具体操作按照已经掌握的就好了。 8 淋洗，20ml正己烷，弃掉，再用80ml3：7正己烷：二氯甲烷。最后旋蒸（35℃）装瓶即可准备上样测定。 附录： 一 标签一览： 锥形瓶 抽滤瓶 分液漏斗（上/下）（可以考虑只用一个，这样需要多加一个平底瓶，贴近了李莉师姐的做法） 茄形瓶（1（考虑换）/2/考虑加第三个 注意贴标签的位置，参照李莉师姐）小瓶子 柱子和茄形瓶2号用一个就行，参照师兄们的做法 二 注意事项拾遗： 加内标时，要注意记录一下内标的浓度之类的参数。共加100ppb，要是浓度是2ppm，就加50微升，要是1ppm，就加100微升。