南京大学分子生物学第14讲.ppt

三、嵌合剂的致突变作用 四、转座成分的致突变作用 五、增变基因 六、紫外线的致突变作 七、突变热点 （一）突变热点的检测 （二）突变热点形成的机制 1，5-甲基胞嘧（MeC）啶造成的突变热 （1）MeC的形成及脱氨氧化 （2）DNA复制的不同时期MeC脱氨氧化的后果 2，短的连续重复序列造成的突变热点 3，不同突变剂造成的突变热点不同 第五节 离体定向诱变 一、寡核苷酸引物诱变 （一）定点突变基因的克隆过程 1，正链DNA的制备 2，突变引物的合 3，异源双链DNA分子的制备 4，转化宿主 5，突变体的筛选 （1）限制位点筛选法 （2）杂交筛选法 （3）生物学筛选法 6，突变基因的鉴定 （二）提高寡核苷酸引物诱变效率的方法 1，Kunkel定点诱变法 脱氧尿苷三磷酸酶缺陷（dut-）和尿嘧啶-N-糖基酶缺陷（ung-）大肠杆菌的特点：可以合成掺U的DNA分 2，硫代磷酸诱变法 一些核酸内切限制酶无法切割硫代磷酸DNA分子 二、PCR诱变法—— 大引物诱变法（megaprimer method of mutagenesis） 三、盒式诱变 原理：当靶DNA序列两侧存在两个限制性酶切位点时，两者之间的DNA序列就可以被酶切去除，并由一段人工合成的具有突变位点的寡核苷酸片段取代野生型基因中的相应序 第五章 原核生物基因表达的调控 第一节 概述 一、原核生物的特点 二、原核生物基因表达