实验9-2 邻二氮菲分光光度法测定微量1.docVIP

邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一.实验目的实验目的实验目的实验目的 1．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理 2．熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长 3．学会制作标准曲线的方法 4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。 二、实验原理实验原理实验原理实验原理 邻二氮菲（1，10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+lgK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1104L/moL.cm, ）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+： 2 Fe3++2NH2OHHCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl- 本方法的选择性很高。相当于含铁量40倍的Sn、AI、Ca、Mg、Zn、Si,20倍的Cr、Mn、V、P和5倍的Co、Ni、Cu不干扰测定。 三、试剂与仪器试剂与仪器试剂与仪器试剂与仪器 仪器：1．721型分光光度计; 2．50mL容量瓶8个（2人/组）,250mL1个 ; 3．移液管：2 mL1支，10 mL1支; 4．刻度吸管：10mL、5mL各1支; 试剂： 1．铁标准储备溶液0.1mg/mL; 2．铁标准使用液0.0100mg/mL; 3．HCI 3moL/L; 4．盐酸羟胺10g.L-1（新鲜配制）； 5．邻二氮菲溶液1g.L-1; 6．HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）; 7． 待测溶液2到4mL。 四、实验步骤 1．绘制吸收曲线： 用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.0、4.0 mL分别放入50 mL容量瓶中，加入2.5 mL盐酸羟胺溶液、5 mL邻二氮菲溶液和5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置10分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度A值。当临近最大吸收波长附近时应间隔波长5—10nm测A值，其他各处可间隔波长20—40nm测定。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。 2．标准曲线的绘制： 用吸量管分别移取铁标准溶液（0.0100mg/mL）0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL依次放入8只50mL容量瓶中，分别加入盐酸羟胺溶液2.5mL，稍摇动，再加入邻二氮菲溶液5.0 mL及5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置10分钟，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，选择最大测定波长,分别测定A值。 3. 显示反应时间的影响： 用吸量管分别移取铁标准溶液（0.0100mg/mL）2.0mL于50 mL容量瓶中，加入2.5 mL盐酸羟胺溶液、5 mL邻二氮菲溶液和5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置10分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，选择最大测定波长,分别测定其在0,5,10.30,60,90,120min的A值。 4. 试样的测定： 用吸量管分别移取铁标准溶液（0.0100mg/mL）2.0mL于50 mL容量瓶中，加入2.5 mL盐酸羟胺溶液、5 mL邻二氮菲溶液和5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置10分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，选择最大测定波长,测定A值。 五、实验注意事项 ⒈不能颠倒各种试剂的加入顺序。 ⒉读数据时要注意A和T所对应的数据。透射比与吸光度的关系为:A=log(I0/I)= log(1/T)；测定条件指：测定波长和参比溶液的选择。 ⒊最佳波长选择好后不要再改变。 ⒋每次测定前要注意调满刻度。 六．数据处理. 1,.铁标准曲线的制作(λ=510nm) V铁标/mL 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 待测溶液 m铁mg 0.0100 0.0200 0.0300 0.0400 0.0500 0.0600 0.0700 X A 0.130 0.236 0.354 0.474 0.592 0.713 0.814 0.312 由以上数据，得标准曲线图如下： 结论：由铁的标准曲线求得X=0.0261mg。 所以待测溶液中铁含量为0.01305mg/mL。 2.显示反应时间的影响(λ=