介质过滤除菌.PPT

第五章 发酵工程的灭菌与空气除菌 第一节 常用的灭菌方法 一、化学灭菌 概念：用化学药品直接作用于微生物而将其杀死的方法。 某些化学药剂能与微生物细胞物质发生反应而具有杀菌作用。如甲醛、氯（或次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐（如新洁尔灭）等。 二、射线灭菌 紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的高能粒子能起到灭菌的作用。波长为2.537×10-7的紫外线有灭菌效果，范围250-270nm。 三、干热灭菌 干热灭菌法， 将金属制品或清洁玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，即可达到彻底灭菌的目的。 在这种条件下，可使细胞膜破坏、蛋白质变性、原生质干燥，以及各种细胞成分发生氧化。 灼烧，是一种最彻底的干热灭菌方法，但它只能用于接种环、接种针等少数对象的灭菌。 四、湿热灭菌 利用饱和蒸汽进行灭菌。蒸汽冷凝时释放大量潜热，并具有强大的穿透力，在高温蒸汽的作用下，微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键和氢键受到破坏，致使微生物在短时间内死亡。 湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。细胞内蛋白质含水量高，容易变性；高温蒸汽对蛋白质有高度的穿透力。 多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理5～10min后即可杀死； 酵母菌和真菌的孢子稍耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死； 而细菌的芽孢最耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。 第二节 培养基与发酵设备的灭菌 一、灭菌的基本原理 培养基中含有丰富的营养，工业化生产中，体积大，生产的时间长，很易受到杂菌的污染。 工业上常采用湿热灭菌的方法。 灭菌的要求：工业上无菌（灭菌度为1000）。即尽可能的出去杂菌的同时，还要尽可能的减少营养物的损失。 常采用的条件为：121℃，20-30 min。 灭菌的基本理论（一）微生物的死亡动力学 A:对数残存定律： 微生物受热死亡的主要原因是高热能使蛋白质变性，这种反应可认为是单分子反应，死亡速率可视为一级反应，即与残存的微生物数量成正比， （四）影响培养基灭菌的因素 1、pH值的影响 pH值对微生物的耐热性影响很大，pH为6.0~8.0时微生物最不易死亡， pH 6.0时氢离子易渗入微生物的细胞内。 2、培养基成分 培养基的成分中，油脂、糖类、蛋白质都是传热的不良介质，会增加微生物的耐热性，使灭菌困难。 浓度较高的培养基相对需要较高温度和较长时间灭菌。 高浓度的盐类，色素则削弱其耐热性，故较易灭菌。 3、培养基中的颗粒物质 培养基中的颗粒物质大，灭菌困难，反之，灭菌容易。一般说来，含有颗粒对培养基灭菌影响不大，但在培养基混有较大颗粒，特别是存在凝结成团的胶体时，会影响灭菌效果，必须过滤除去。 4.微生物细胞中的水含量。含水量越少，灭菌时间越长。比如孢子、芽孢。 5.微生物性质与数量。细菌的营养体、酵母、霉菌对热敏感；放线菌、酵母、霉菌孢子对热抵抗力强；菌龄的影响；芽孢耐热；培养基中的微生物量，N正比于N0。 6.冷空气排除情况 7.泡沫：形成耐热层，热量传递难， 避免突然进汽或加大排气。 8.搅拌 培养基灭菌 培养基灭菌温度的选择 　原则：高温快速灭菌 　　　 培养基的灭菌方式 分批灭菌 　　概念：将配制好的培养基输入发酵罐内，用直接蒸汽加热，达到灭菌要求的温度和压力后维持一定时间，再冷却至发酵要求的温度，这一工艺过程称分批灭菌（实罐灭菌） 　　优点：设备要求低，操作简便 　　　　缺点：营养成份有损失 　　　　　　　罐利用率低 　　　　　　　不能采用高温快速灭菌工艺 注意事项： 经一段预热时间预热至90℃，使物料受热均匀，减少冷凝水量 达到灭菌温度（120 ℃）时，开始计算维持时间（保温时间）。生产上采用30min 采用快速冷却方式，减少营养成份的损失 连续灭菌 　　概念：培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送入一灭菌的发酵罐内的工艺过程称为连续灭菌 　　 优点：可采用高温快速灭菌工艺 　　　　　 发酵罐非生产占用时间缩短，容积利用率提高 　　　　　 热能利用率合理，适于自动化控制 　　 缺点：不适合高粘度的培养基的灭菌 　　　　　 染菌可能性增高 形式 由热交换器组成的连续灭菌系统 由热交换器组成的连续灭菌系统的特点 螺旋板式流道宽，流速快，适合于粘度较大的培养基的灭菌；板式适于粘度较小的培养基的灭菌 含淀粉的培养基，须经酸解或酶解降低粘度后，才能进行连续灭菌 粘度过大的培养基需增加灭菌时间，培养基中悬浮颗粒不能大于2mm 蒸汽直接加热培养基的连续灭菌系统 　　系统：直接用蒸汽加热培养基至灭菌温度 　　缺点：随蒸汽冷凝培养基被稀释，引起培养基粘度变化，使灭菌的温度和压力不易控制 连消系统 调浆缸 连消系统特点