母液的配制和保存.PPT

1.大量元素 原则上可以混在一起，但硫酸镁 （MgSO4?2H2O）和氯化钙（CaCl2?2H2O） 要分别单独配制，因为高浓度的Ca2+和Mg2+ 与磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。Ca2+和 PO43-一起混合易发生沉淀。但定容后，沉淀即会消失。 2.铁盐也容易发生沉淀，需要单独配制。一般硫酸亚铁（FeSO4?7H2O）和乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)配成100倍浓度的铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀。 3.微量元素可配成50或100倍浓度的混合 母液。KI可以单独配成母液。 4.氨基酸可以和维生素一起配成100或200倍液，也可将它们中的几种有机成分分别配制，以便配制不同培养基时使用方便。一般配制浓度为甘氨酸1-2mg/ml，维生素B10.5-1 mg/ml，维生素B60.5-1 mg/ml，烟酸0.5-1 mg/ml，肌醇20mg/l。 5.植物生长调节物质 也可以分别配制成溶液，储存于冰箱。一般浓度为0.5-1 mg/ml。 IAA、NAA、IBA、2,4-D之类生长素，可先用少量0.1N氢氧化钠或乙醇溶解，然后再定容到所需要的体积。KT、BA等细胞分裂素则可用少量0.1N盐酸加热溶解，然后加水定容。 四、培养基的配制及其灭菌 1．培养基的配制方法 （1）将配制好的母液按顺序排列。 （2）然后依次用专用的移液管按需要量吸取预先配制好的各种母液及激素等，并混合在一起。 （3）再将琼脂和糖加入其中。 （4）最后加蒸馏水定容至所需体积。 （5）随即用0.1N-1.0N的氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）将pH调至所需的数值（一般通过高压灭菌，pH值会向酸性一则偏移0.1-0.5），然后分装到培养瓶中。大多数植物都要求在pH5.6-5.8的条件下进行组织培养。 2.培养基的分装与灭菌 培养基合成后要趁热分装，100ml的容器约装入30-40ml培养基，即1L培养基约装35瓶左右。 分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。 培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热。灭菌结束后，等气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。 注意事项 在灭菌后应尽快地转移培养瓶使其冷却。一般应将培养基储藏于30?C以下的室内。 某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能和其它培养基一起高压消毒，而要进行过滤消毒。 液体培养基的配制方法，除不加琼脂外，其它与固体培养基相同。 3．玻璃器皿的灭菌 4.金属器械的灭菌 培养基的制备： 称量融解Agar→加Suc溶解→加入母液→定容、调 PH→分装、封口→灭菌、标记储存 例1：配制1L以下培养基 MS＋BA2＋NAA0.2＋Suc3.0％＋Agar0.8％ MS：I 50ml ， II 5ml ， III 5ml ， IV 5ml BA：20ml NAA：2ml Suc：30g Agar：8g 例2：N6＋GA3 0.1＋ Suc5.0％＋Agar0.8％ 过滤灭菌 例3：1/2MS＋NAA0.1 ＋Suc3.0％＋Agar0.8％ MS母液：25 ，2.5 ，2.5 ，2.5 （注意：工作中常为25，5，5，5） 例3：Heller无＋White有＋KT0.1＋BA2＋IAA0.5＋椰乳10%+Ac 0.5%＋肌醇100mg 例4：配制MS0 只有MS基础物质，无激素 返回 MS无＋White有＋KT0.1＋BA2＋IAA0.5＋GA30.2＋椰乳10%+Ac 0.5%＋KNO3400mg＋Gly200mg 要点： 1、基本培养基： MS无机盐＋White有机物 2、激素使用水平：mg/L 贮备浓度： 1mg/10ml 3、椰乳10% V/V 液/液