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真核生物基因敲除的技术路线-西安电子科技大学
1
真核生物基因敲除的技术路线
构建重组基因载体
将重组DNA导入胚胎干细胞纯系中,使外
源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发
生同源重组
重组载体中的DNA整合到内源基因组中,
并加以表达
2
高等动物基因敲除技术 分子生物学 夏玉琼
西安电子科技大学
目的 1 2
基因 棕色小鼠
tk neo
3 4a 同源重组
4a 4b 4c
4b 非同源重组
4c 未重组
5a 代替野生型基因
5a 5b 5c
5b 随机插入
5c 没有插入
6a 含插入基因的细胞
6a 6b 6c 6b 含随机插入的细胞
6c 不含插入的细胞
7 7 收集细胞
8 用抗生素G418和
8 丙氧鸟苷处理
3
分子生物学 夏玉琼
西安电子科技大学
在正常胚胎中植入 将胚胎植入待孕黑色母体
含插入基因的细胞
新生的雄性嵌合鼠(棕色-黑色)
野生的雌性黑鼠 成熟的雄性嵌合鼠(棕色-黑色)
杂合子 杂合子
纯合子,用于研究
4
基因捕获法
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