分子生物学 第一章节 基因.ppt

第一篇;;本章要点: 基因的基本概念及基因的结构特点; 结构基因中储存的遗传信息; 基因结构变异及其与疾病的关系;;基因的基本概念:;核酸是遗传信息的载体;近三十年来因从事这方面的研究而获得诺贝尔奖金的科学家列表如下：;M. Delbruck(美） A. D. Hershey（美） S. E. Luria（美）;DNA序列测定 即核酸DNA分子一级结构的测定，是现代分子生物学一项重要技术。序列分析的目的有二： 1）确证性测序 通过测序对突变进行定位和鉴定，应用时测定野生型基因上同源区和突变体的相应序列，直接在一张胶片上比较二者序列差异（已知基因序列）。 2）从头测序 目的是提供一段DNA准确的核苷酸序列（未知基因序列）。;测序在生物医学领域应用2个方面： 1）对已知基因序列检查 特别是有遗传倾向的病例，检测相关基因有无突变，有助于阐明疾病发病机理及建立相应诊疗方案。 2）对已经克隆的未知基因序列进行测定 从而阐明该基因的一级结构，如人类基因组计划中大量的工作是要阐明克隆片段的核苷酸排列顺序。 ;DNA序列测定方法: 1)Sanger法(双脱氧链末端终止法) 在DNA聚合酶催化下,以单链或双链DNA为模板,采用DNA引物引导新链DNA的合成; DNA链中核苷酸是以5’-3’磷酸二酯键相连,2’脱氧核苷三磷酸(dNTP)是合成DNA的底物; 当在底物中加入2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),可造成新生链的延伸终止; 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可分辨出具有特定末端不同长短的DNA片段;;DNA序列测定方法: 2)Maxam-Gilbert法(化学裂解法) 将待测DNA片段3’或5’端进行放射性同位素标记,并分为四组,每组用不同的化学试剂处理; 每组分别形成以特异性碱基为结尾的长度不同的DNA片段; 四组产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影后可读出样品的序列;;DNA序列测定方法: Maxam-Gilbert法(化学裂解法)的优点: 所测序列是原待测DNA分子; 可以分析甲基化等DNA修饰的情况; 可以研究DNA二级结构及蛋白质与DNA的相互作用;;2、DNA一级结构的基本特点 4种dNTP以3’、5’磷酸二酯键相连构成一个没有分支的线性大分子。 它们的两个末端分别称5’末端（游离磷酸基）和3’末端（游离羟基）。;;3、DNA的甲基化 DNA的一级结构中，有一些碱基可以通过加上一个甲基 而被修饰，称为DNA的甲基化(mythylation of DNA)。 1）原核生物（细菌）有限制一修饰系统（见第三章） ①对自身DNA产生保护作用。 ②抵御外源DNA（噬菌体）的入侵。 2）真核生物中的DNA甲基化在基因表达调控中有重要作用（见第六章）;（二）DNA的二级结构 1.双螺旋的基本特征 1）主链 脱氧核糖和磷酸基相互连接构成DNA的主链。 从化学键的方向来看，双螺旋中两条多核苷酸链是反向平行的。 二条主链处于螺旋的外侧，碱基处于螺旋的内部，由于糖 和磷酸根的化学性质，主链是亲水的。 两条链形成右手螺旋，有共同的螺旋轴，螺旋的直径是20A。 2）碱基对 由于几何形状的限制，只能由嘧啶和嘌呤配对才能使碱基对合适地安置在双螺旋内。 若两个嘧啶配对则几何形状太小，两个嘌呤配对则几何形 状又太大，为双螺旋所容纳不下。只有A-T碱基和G-C碱基对 的几何形状正适合双螺旋的大小。;3）大沟和小沟 沿螺旋轴方向观察，配对的碱基并不充满双螺旋的空间。 由于碱基对的方向性，使得碱基对占据的空间是不对称的，因此在双螺旋的表面形成二个凹下去的槽，一个槽大些，一个槽小些分别称为大沟和小沟。 双螺旋表面的沟对DNA和蛋白质的相互识别是很重要的，因为在沟内才能觉察到碱基的顺序，而在双螺旋的表面，是脱氧核糖和磷酸重复结构，没有信息可言。（蛋白质 核酸，核酸 核酸）;;2.三股螺旋DNA（tsDNA） tsDNA是在DNA双螺旋结构碱基上形成的。 三条链均为同型嘌呤或同型嘧啶，即整段的碱基均为嘌呤或嘧啶，其中两条链为正常双螺旋，第三条链位于双螺旋的大沟中。 根据三链的组成和相对位置分为两种基本类型： （1）Pu（代表嘌呤链）—Pu—Py（代表嘧啶链）型，在碱性介质中稳定； （2）Py—Pu—Py型，较多见，在偏酸性PH中稳定。 第三碱基在Py—Pu—Py型中为T=A=T，C+=G三C（第三位点 的“C”必须质子化）配对；在Pu—Pu—Py型中存在G=G三C，A=A=T配对。;（三）DNA的三级结构 DNA的三级结构指双螺旋链的扭曲。 超螺旋是DNA三级结构的一种形式，DNA在核小体中的扭曲方式也是一种超螺旋