一个B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞杂交瘤细胞化学性质单一.PPT

植物组织培养和动物组织培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 理论基础 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 六、动物细胞的培养和克隆形成 2、广义的动物组织培养(组培)包括？ 细胞培养、组织培养和器官培养。 1、动物细胞培养和组织培养之间的关系如何？ 动物组织培养过程中可伴随组织，细胞分化 二、动物的细胞融合技术及其应用 诱导方式 物理法：离心、振荡、电融合技术 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的仙台病毒 1、细胞融合与细胞杂交： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 2.杂交瘤技术和单克隆抗体制备： (1).传统抗体生产方法： 抗原 动物体内 抗体 刺激 效应B (抗体不纯) 筛选单一效应B细胞 不能增值，产生大量抗体 特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏。 (2).单克隆抗体制备过程： 设计方案： 一个B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 + 化学性质单一、特异性强的抗体。 特性： 主要用于制备单克隆抗体 获得杂种植株 用 途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？ 4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。 1、该实验方案的目的是__________ 3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______ 5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。 制备单克隆抗体 效应B细胞 抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 三、动物的克隆繁殖 1、动物细胞全能性的表现程度： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。 无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。 癌细胞仍能逆转为正常细胞。 按分化潜能分： (1)全能干细胞：具有形成完整个体的分化潜能。如胚胎干细胞。 (2)多能干细胞：具有分化出多种细胞组织的潜能，失去发育成完整个体的能力。 (3)专能干细胞：只能向一种类型或密切相关的两种类型分化的细胞。如骨髓干细胞、皮肤生发层细胞等。 按来源分： (1)胚胎干细胞：当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团的细胞即为胚胎干细胞。 (2)成体干细胞：指已分化特定组织中的未分化细胞，可来源于胚胎、胎儿和成人的组织中，如造血干细胞、神经干细胞、成肌细胞等。 干细胞的分类： 2、动物难以克隆的根本原因： 基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的； 一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。导致基因组中的基因活动不完全． 如：哺乳动物的红细胞只 有少量的线粒体。 3、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖： 胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。 绵羊“多莉”克隆过程： 涉及的技术： 　核移植 　胚胎移植 克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 体细胞克隆成功的意义： 1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受 精卵时期的功能。 2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。 应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。 重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。 * 为什么进行动物细胞培养？获取细胞或细胞分泌蛋白 * * 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。癌细胞仍能逆转为正常细胞。 第3节、动物的克隆 1、动物细胞培养 （一）动物细胞、组织培养培养 将动物体内的一部分组织取出 分散成单个细胞 人工控制的条件下 细胞得以生存并保持生命活动现象 生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等 机械消化或胰酶消化 （1）定义 （二）动物细胞的培养过程 取动物胚胎 或幼龄