Cy357NHSester和带NH2多肽和抗体连接实验.PDFVIP

西安凯新生物科技有限公司 Cy3/5/7 NHS ester 和带NH2 多肽和抗体连接实验方法及步骤 Cy3 NHS ester, Cyanine5 NHS ester 和Cyanine7 NHS ester 可以标记含有amine 的 多肽，抗体，蛋白，DNA 和寡核苷酸及其他小分子。在反应条件下NHS 可以和 NH2 发生反应，从而连接到一起。 （一）：Cyanine5 NHS ester 和多克隆抗体的连接实验方法和步骤 【准备材料】： Cy3 NHS ester purchased from xi an ruixibio anti-GST 多克隆抗体purchased from Abcam 【实验步骤】： 1. 在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST 抗体(浓度为0.5 mL at3 mg/mL)， 常温透析4 小时。 2. 在4 °C 用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再透析过夜。 3. 第二天用1 L 0.1 M NaHCO3 (pH 8.3)透析4 小时。 4. 用0.22 μ m 注射器过滤头过滤抗体溶液。 5. 用0.1 M NaHCO3 稀释少量的抗体，在280nm 处测其紫外吸收值计算标记 抗体的总量(IgG antibody 摩尔吸光系数170 000 M-1 cm-1 at 280 nm). 6. 用DMSO 配置Cy3 NHS (MW 616.19)溶液浓度为10 mg/mL;计算所需体积 以得到想要的Cy3NHS 和抗体的比值(例如20:1) ，然后慢慢将其加入到抗体溶液 中，同时在暗处常温缓慢搅拌45 分钟。 7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常温避光透析4 小时除去未标记上的Cy5 。 8. 在4 °C 用新鲜的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析过夜。 9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液常温避光透析4 小时, 在4 °C 常 温避光再次透析过夜。 10. 用0.22 μ m 注射器过滤头过滤抗体溶液。 11. 用0.01 M PBS/0.01 % 叠氮化钠整数倍稀释标记抗体溶液，测量280nm(蛋白) 和552nm(Cy)处的紫外可见吸光度。 12. 产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 叠氮化钠溶液中，-20 ℃避光储 存。 F/P 计算： Cy3 在552nm 摩尔吸光系数为150 000M-1 cm-1;此蛋白在280nm 的摩尔吸光系 数为170 000 M-1 cm-1; 不同蛋白的摩尔吸光系数不一样;.Cy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm 处的 8%。按以下公式计算F/P 值。 地址（Address ）:中国·西安·莲湖区兴中路3 号 邮编（PostCode）:710016 传真（Fax）：+86(0)29 邮箱(E-Mail):3495811982@ 电话 (Tele) :+86-029-6888 1181 手机（Mobel）:136 1921 7766 西安凯新生物科技有限公司 [Cy3] = A552/150000 [antibody] = {A280 - (0.08×A552)}/170000 F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/{A280 - (0.08×A552)} （二）：Cyanine5 NHS ester 和标记(D-ser2)-leucineenkephalin 的连接实验方法和 步骤 【准备材料】： Cy5 NHS ester purchased from xi an ruixibio (D-ser2)-leucineenkephalin purchased fromsigma 【实验步骤】： 1. Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μ L DMSO 后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有 (D-ser2)-leucine-enkephalinacetate(YSGFLT, 0.75 mg) 的400 μ L DMSO 溶液。 (Dye 和peptide 投料比是1:1) 2. 然后加入15 μ L 三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。 3.