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胚胎性别控制、性别鉴定与单精注射 主讲人 邓双义 内容提要 性别控制 性别鉴定 单精注射 性别控制 性别控制（Sex Control）是经过人为干预，使动物的后代按人们所需的性别而繁衍的技术。 其目的有三： 1）可以从受性别限制的性状和其相应受影响的性状上获益，如母畜产奶，公畜产肉等； 2）消灭不理想的隐性性状，防止性连锁疾病； 3）加快遗传进展及畜群的更新。 性别决定的生物学机制 1．性别决定的发育学机制 2．性别决定的遗传学机制 性别决定的发育学机制 家畜胚胎发育的早期阶段为性别未分化期，仅有位于中肾内缘的性腺原基，这种未分化的性腺中胚层处于中性。家畜性别决定的取向是未来性腺发育的导向，而性别决定的结果又是通过性腺分化及性表型来体现的。 性别决定的遗传学机制 Sinclair et al. (1990)在人类Y染色体的短臂近似常染色体区域分离和克隆到一个单拷贝基因，与性别决定相关，称之为性别决定区Y基因（Sex-determined region Y-linked gene, SRY;小鼠用Sry表示）。其编码蛋白SRY所含HMG box在许多动物中保守，并在成年动物睾丸中特异表达。 SRY/Sry现已在包括有袋类和真兽亚纲动物在内的哺乳动物Y染色体上发现了其同源基因。SRY/Sry不但与睾丸决定有关，而且还是睾丸决定过程中所必需的唯一来源Y染色体的基因。 性别控制的途径 就目前研究的内容，对家畜性别控制主要从两个方面进行： 一、人工受精过程的性别控制； 二、胚胎移植过程中的性别控制。 人工受精过程中的性别控制 人们已确认动物的性别是由X和Y染色体决定的。由于X精子与Y精子之间存在着微弱的生物学差异，如根据精子的形态、比重、膜电荷、抗原性、对酸碱的敏感性、运动性等不同，进行各种试验，识别带有X染色体和Y染色体的两类精子，并将它们分开，进行人工受精，这样可以控制家畜性别；或对公、母畜同时施用内、外源激素等综合措施，来控制家畜的性别。但没有取得较为理想的结果。 胚胎移植过程中的性别控制 正常受精卵是从卵子获得一条X染色体，再从精子获得一条X染色体或Y染色体，以此决定胚胎的性别。据此，人们对早期胚胎利用特异性DNA探针或PCR技术进行鉴定，然后按要求选择特定胚胎，这些胚胎移植后可以正常发育为预定性别的个体，从而达到控制家畜性别之目的。 精子分离与鉴定的方法 X，Y精子的生物学差异 精子分离的研究现状 X，Y精子的生物学差异 Y精子F小体 精子的重量 精子运动和表面电荷 精子表面H-Y抗原的分布 精子的耐酸碱性 Y精子F小体 1968年Cosperson等以奎纳克林-马斯德氏法在研究男性染色体时发现，在Y染色体长臂末端发出有比其它部分强的荧光亮点，将这些点称为F-A小体， 1970年Barlow等首次报道在Y精子头部发现F小体。且F小体在人和家畜的精子上都能见到。后来经实验反复证明，有F小体的精子一定是Y精子，而没有的则是X精子。 精子的重量 X与Y精子在重量和比重上的唯一差别是两者所含DNA量的不同。X染色体比Y染色体体重大，DNA含量多。两者DNA含量的差异牛为3.9％，绵羊为2.4％，田鼠为12.5％。家畜的差异一般在3～5％之间。由于重量的差异，从而引起精子在稀释液中的运动力、沉降速度等不同。 精子运动和表面电荷 一般认为Y精子比X精子的活力强，且在含有血清白蛋白的稀释液中能沿直线运动。精子的表面均带有负电荷，但X、Y精子表面膜电荷的分布有差异。Y精子尾部膜电荷量较高，而X精子头部膜电荷含量较高。由于其电荷量分布不同，因此精子在缓冲液中电泳时，阳极方向得到的X精子多，阴极方向的Y精子多；但是也有的报道结果与上述相反 精子表面H-Y抗原的分布 H-Y抗原即雄性特异性组织相容性抗原。早在1955年由Eichwald和Silmser观察到雌性C57BL/6小鼠排斥同种雄鼠皮肤移植片时提出的。Gikberg等（1971）在早期H-Y抗原检测所涉及的细胞毒性实验中发现，在一份精液中大约有50％的精子被致死，猜想可能死精子是Y精子。H-Y抗原是一种弱抗原，其分布依精子的来源不同而有差异，由附睾头分离的精子H-Y抗原主要分布于靠近精子的尾部。附睾尾分离的精子H-Y抗原主要分布在顶体后端，而绵羊和牛射出的精子H-Y抗原则分布在顶体后部和尾部中段。已证实，只有Y精子才能表达H-Y抗原。 精子的耐酸碱性 在弱酸弱碱中， Y精子嗜碱而不耐酸， X精子与之相反。 精子分离的研究现状 沉淀法