PCR生物安全与防污染措施教学教材.pptVIP

上海市临床检验中心 黄维纲;第一部分检验标本的管理和防污染;实验室管理要求 建立标本的唯一编号识别系统。 标本采集、运送、验收、标本前处理、标本保存（或安全处置）的具体要求和操作规程，标本全程可跟踪。 实验室在标本接收时应有其状态的详细记录。 实验室应对标本保存条件进行监控和记录。;一、建立标本的唯一编号识别系统 多采用条形码系统，保证唯一性标识。 认真检查核对患者信息。 对实验过程的时间控制要求，要求记录的时间点：应反映标本采集时间、标本接收时间、测定时间、报告时间、（条形码预制时间、关联时间、报告打印时间）。;二、标本采集要求： 建立标准操作规程；应对各类标本和不同检测项目的采集方法程序作出明确、具体的规定。 做好标本采集的技术培训工作。 做好标本流程规划和唯一性标识的工作。 控制好采样和送检的时间。 要点：???集标本一定要正确，采集时间要合适，使用正确的标本容器。;标本采集时生物安全;标本采集中的防污染;三、标本运送 实验室布局应尽量满足及时送检和方便患者。 PCR标本接收不宜放在标本制备区。 尽可能及时送检：靶核酸是DNA，应在采血后8小时内送到实验室，靶核酸是RNA，应在采血后4小时内送检并处理。时间较长，应加冰运送和保存。 加入适当的稳定剂，如GITC(异硫氰酸胍盐）。 ;专人验收标本 实验室在标本接收时应有其状态的详细记录. 标本质量的验收 血清（浆）标本：肉眼可见的溶血、脂血 分泌物标本：泌尿生殖道分泌物，镜检观察是否有上皮细胞；痰标本中应有白细胞。;及时分离血清和血浆。 严格执行离心的操作规程。 严格控制离心后标本转送的时间 如不能及时检测，应对标本保存条件进行监控和记录;六、PCR检测的主要污染源和去污染方法;主要污染源 临床标本中存在的大量待测微生物 实验室环境中的大量微生物 以前扩增产物的残留污染 以前分析研究的特定微生物 科研中得到的质粒克隆;防污染措施 严格分区实验室，各个区域必须严格独立使用各自设备、工作服、手套、通风系统，每个区的试剂和废料，必须在各自区域内分装和包装，防止交叉污染。 严格遵守工作程序：防止通过头发、眼镜、首饰和衣物从污染区携带至清洁区。;去污染措施 化学清污；10%次氯酸钠，用70%乙醇或清水洗去次氯酸钠。 扩增产物的修饰 扩增前；紫外线（UV)照射、尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）方法。 扩增后；呋喃并香豆素化合物（如补骨脂素和异补骨脂素）加合法、引物水解法、羟胺加合法。 ;第二部分实验室生物安全; 实验室生物安全; 实验室生物安全; 实验室生物安全;实验室生物安全措施;实验室生物安全 管理要求; 一、实验室生物安全组织体系;法定代表人职责;实验室生物安全管理责任部门或责任人 职责;实验室生物安全管理责任部门或责任人 职责;实验室负责人职责;生物安全管理员职责;生物安全手册;二、生物安全实验室备案;三、人员管理;三、人员管理;四、菌（毒）种和生物样品管理;四、菌（毒）种和生物样品管理;四、菌（毒）种和生物样品管理;四、菌（毒）种和生物样品管理;五、实验室环境、设备与器材的消毒和废弃物的处置;五、实验室环境、设备与器材的消毒和废弃物的处置;实验室物品危险性分类;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;生物实验室消毒措施;化学废弃物 感染性废弃物（包括利器） 放射性废弃物;化学消毒 高压消毒;六、应急处置;六、应急预案;实验室生物安全 技术要求;一、生物危害评估;生物安全实验室等级;一级生物安全防护水平 BSL-1;BSL-1;生物安全I级（BSL-1）设施设计要求;易于：清扫、消毒;二级生物安全防护水平BSL-2;BSL-2;BSL-2;推广BSL-2的理由;生物安全II级（BSL-2）设施设计要求:;三级生物安全防护水平（BSL-3）;生物安全III级（BSL-3）（次级屏障）;四级生物安全防护水平（BSL-4）;生物安全IV级（BSL-4）（次级屏障）;二、设施设备;实验室设计和设施;无需特殊选址，可以设置在共用建筑物内。但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计和设施，有开启式窗户的应设置纱窗。 布局应分实验区和非实验区，二者之间应有效分隔，在实验区外应有实验所需用品的储存、个人物品存放和工作人员休息的空间。实验室的人流、物流也应符合从清洁到污染的要求。 墙壁、天花板和地面应平整、不渗水、易清洁并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑。 实验台和橱柜应牢固稳定，实验台面能防水、耐腐蚀、耐热、易消毒。;每个实验室应在靠近出口处设洗手池，洗手龙头应为自动感应式、长手柄式或脚踏式，备有洗手皂液，必要时配备快速消毒洗手液。 室内仪器和物品的摆放合理，便于操作，并应遵循易消毒的原则。 室内应有空气和物体表面