猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备.docVIP

猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备 1026江苏农业(JiangsuofAgr.Sci.),2011,27(5):1026～1030 冯志新,王海燕,刘茂军,等.猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备[J].江苏农业,2011,27(5):1026—1030 猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备 冯志新,王海燕,刘茂军,甘源,吴叙苏,邵国青 (江苏省农业科学院兽医研究所,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京210014) 摘要:为制备猪SIgA的特异性单克隆抗体,该研究采用饱和硫酸铵盐析法从猪初乳中提取猪sIgA蛋白,分 别经SephadexG一200凝胶层析,DEAE52纤维柱离子层析及ProteinA柱亲合层析纯化.以纯化的猪SIgA蛋白为抗 原免疫BALB/c小鼠制备抗猪SIgA的单克隆抗体.结果显示:已获得6株特异的抗猪SIgA的单克隆抗体,分别命 名为2D9E6,2D9E9,3ElG2,3ElH5,4H5B7和4H5B10,6株单抗均为IgG1,K型.将其中1株2D9E6制备腹水,经 纯化后ELISA效价可达1:81000以上.表明以猪sIgA天然蛋白为免疫原,成功制备了6株高特异性的单克隆抗 体,可为猪黏膜免疫研究提供基础材料. 关键词:猪SIgA;纯化;单克隆抗体 中图分类号:$852.62文献标识码:A文章编号:1000-4440(2011)05—1026—05 PurificationofSIgAfromporcinecolostrumsandpreparationofitsmono— clonalantibody FENGZhi—xin,WANGHai—yan,LIUMao-jun,GANYuan,WUXu—SH,SHAOGuo—qing (InstituteofVeterinaryMedicine,JiangsaAcademyofAgriculturalSciences,KeyLaboratoryofAnimalDiseasesDiagnosticandImmunology,n如￡of Agriculture,NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio-products,Nang210014,China) Abstract:ToprepareformonoclonalantibodyagainstporcinesecretoryimmunoglobulinA(sIgA),porcineSIgA wasisolatedandpurifiedfromcolostrumsbyaprocedureofprecipitationwithsaturatedammoniumsulfate,chromatography withsephadexG一200,ion—exchangechromatographywithDEAE52andaffinitychromatographywithproteinAresin.The BALB/emicewereimmunizedfourtimeswiththepurifiedSIgA.SixstrainsofhybridomacellsagainstporcineSIgApro— tein,named2D9E6,2D9E9,3ElG2,3ElH5,4H5B7and4H5B10,wereobtainedthroughparallelscreeningwithELISA andWesternblot.AllsixmonoclonalantibodiesbelongedtomouseIgG1.Kisotype.Themonoclonalantibodystrain2D9E6 waspurifiedfromhydr0peritoneum,anditsELISAtiterwashigherthan1:81000. Keywords:porcineSIgA;purification;monoelonalantibody 动物黏膜免疫系统是机体整个免疫网络的重要组 成部分,具有其独特结构和功能的独立免疫体系.黏 收稿日期:2011-01—13 基金项目:国家自然科学基金项目;江苏省农业科技自 主创新基金项目[CX(10)427,CX(09)619] 作者简介:冯志新(1979.),男,江苏无锡人,博士,助理研究员,主要 从事动物传染病防治研究.(Te1)025(E—mail) zhixinf2000@ 通讯作者:邵国青,(Te1)025(E-mail163.conl 膜免疫防御着外界病原体对机体的入侵,是动物机体 防止感染的第