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保加利亚尖椒遗传转化体系的建立 江苏农业科学2009年第1期一3l一 保加利亚尖椒遗传转化体系的建立 敬国兴,李伏钦,陈永双,何永敏,曾富华 (1.湛江师范学院生命科学与技术学院,广东湛江524048;2.湖南农业大学生物与发酵工程实验室,湖南长沙410128) 摘要:以保加利亚尖椒子叶为外植体,通过农杆菌介导法将抗真菌三价载体(GCR)遗传转化至辣椒,建立了适合辣椒转 化的高效再生体系,结果表明:在侵染液pH值5.2,预培养2d,侵染时间7～8rain,无AS,共培养2d的条件下,抗性不定芽的 诱导分化率达到89%,转基因植株经PCR,Dotblotting检测证明外源基因已整合至辣椒基因组DNA中. 关键词i辣椒;GCR;转化;检测 中图分类号:$641.303文献标志码:A文章编号:1002—1302(2009)01-0031一o4 辣椒是一种重要的蔬菜作物和调料品,各种病害危害导 致辣椒产量和品质受到严重影响,利用基因工程技术是改善 辣椒产量和品质的重要措施之一….在辣椒转基因中,最常 用的是根癌农杆菌介导的叶盘转化法,此法操作简单易 行,转化效率较高.影响植物外植体遗传转化的因素很多,如 植物的基因型,植物组织的种类和生理状态,农杆菌类型,转 化方式,培养条件以及筛选强度等. 收稿日期:2008—07一O1 基金项目:广东省科技计划项目(编号:Z002A2070402);广东省自然 科学基金(编号:5011730). 作者简介:敬国兴(1981一),男,湖南常德人,助教,从事分子生物学 研究. 利用抗真菌蛋白葡聚糖酶(B一1,3一glucanase,Glu.)基 因,几丁质酶(Chitinase,Chi.)基因和萝卜抗真菌蛋白(Rs— AFP2)基因构建三价表达载体,这些基因酶解活性及抑菌 范围各不相同但又有极强协同作用M,保证转化后植株获得 广谱抗病性. 本研究以产量较高的常规品种保加利亚尖椒子叶为试验 材料,在成熟的再生体系基础上,对农杆菌介导抗真菌三 价载体(GCR)转化的影响因子进行了探讨,同时对转基因辣 椒进行PCR,Dotingbloaing检测,验证外面基因是否转入 辣椒. 1材料与方法 通讯作者:曾富华,教授,博士生导师.Te1:(0759)3183622;1.1 E—mail:zengfuhua@. 材料 保加利亚尖椒(Bulgariapointedpepper)购自内蒙古赤峰 (上接第3O页) [5]LussoM,KueJ.Theeffectofsenseandantisenseexpressiontheof PR—NgeneforB一1,3一glucanaseondiseaseresistanceoftobacco tofungiandviruses[J].PhysiolandMolPlantPathol,1996,49(4): 267—283. [6]MelchersLS,StuiverMH.Novelgenesfordiseaseresistancebreed- ing[J].CurrOpinPlantBiol,2000,3(2):147—152. [7]Jonged~kE,TigelaarH,VanRoekelJsC,eta1.Synergisticactivi— tyofchitinasesandB一1,3一glucanasesenhancesfungalresistance intransgenictomatoplants[J].Euphytica,1995,85(1):173—180. [8]迟彦.大豆13—1,3一葡聚糖酶基因转化烟草及抗病性的研究 [J].大连大学,2001,22(6):37—41. [9]DohmA,LudwigC,SchillingD,eta1.Transformationofroseswith genesforantifungalproteins[J].ActaHort,2001,547:27—33. [1O]蓝海燕,王长海,张丽华,等.导入13—1,3一葡聚糖酶及几丁质 酶基因的转基因可育油菜及其抗菌核病的研究[J].生物工程 ,2000,16(2):142—146. [11]NakamuraY,SawadaH,KobayashiS,eta1.Expressionofsoybean B一1,3一endoglucanasecDNAandeffectondiseasetoleranceinki— wifruitplants[J].PlantCellRepoas,1999,18(7/8):527—532. [12]LibantovaJ,BauerM,mlynarevaL,eta1.Transgenietobaccoand potatoplantsexpressi