表没食子儿茶素没食子酸酯对人皮肤hacat细胞的辐射保护作用.pdfVIP

第 31 卷 第 3 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.31, No.3 2013 年 6 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. June 2013 表没食子儿茶素没食子酸酯对 人皮肤 HaCat 细胞的辐射保护作用 葛杨杨 谷 庆 刘 静 葛 欣 唐益庭 罗居东 陈光烈 张舒羽 曹建平 （苏州大学医学部放射医学与防护学院 江苏省放射医学与防护重点实验室 苏州 215123 ） 摘要 用四甲基偶氮唑盐（MTT ）比色法检测不同浓度EGCG 处理 HaCat 细胞 24 、48 和 72 h 的生长变化， 确定 EGCG 的最适作用浓度；将细胞分为对照组、EGCG 单独处理组、X 射线单独照射组、EGCG 联合 X 射 线照射组，克隆形成实验检测 EGCG 对 HaCat 细胞的辐射保护作用；DCFH-DA 检测细胞内 ROS 变化；Annexin V-FITC 检测细胞凋亡的变化；DNA 片段分析出现凋亡的片段；流式细胞术检测细胞周期变化。结果表明， EGCG 在 0 －50 µmol/L 浓度范围内可刺激 HaCat 细胞增殖，高浓度则抑制生长，其效应呈时间依赖性； 50µmol/L 的EGCG 能提高放射后 HaCat 细胞的克隆形成率；EGCG 能抑制 X 射线诱导的细胞凋亡，与单纯照 射组相比，药物+照射组凋亡率由 9.25%降至 7.82%，能抑制 X 射线诱导的凋亡片段；相比于单纯照射组，EGCG 降低了 X 射线诱导的 HaCat 细胞 G2/M 期阻滞。提示 EGCG 对人皮肤 HaCat 细胞具有辐射保护作用；EGCG 可能通过抑制 X 射线引起的 ROS ，从而抑制细胞凋亡及降低辐射诱导的细胞 G2/M 期阻滞发挥辐射保护作用。 关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯，人皮肤 HaCat 细胞，活性氧，辐射防护，细胞凋亡，细胞周期 中图分类号 TL71 ，R811.5 放射治疗越来越多的应用于临床上恶性肿瘤的 试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司，活性 治疗。放射性皮肤损伤是肿瘤放射治疗中常见的早 氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit ）购 期反应，此外核事故也是放射性皮肤损伤的另一重 于碧云天生物技术研究所。 要诱因[1,2] 。因此，减轻正常皮肤细胞辐射损伤意义 1.2 细胞培养 重大。绿茶富含茶多酚，其中表没食子儿茶素没食 子酸酯（EGCG ）是含量最高也是最为重要的一种 人皮肤 HaCat 细胞株购于南京凯基生物科技发 组分。茶多酚具有广泛的生物效应，主要包括抗突 展有限公司，培养于含 10%胎牛血清及青霉素、链 变、抗肿瘤形成、抗炎抗病毒及清除自由基和抗氧 霉素各 100 U/mL 的DMEM 培养液，37℃、5% CO2 [3] [4] 孵箱中培养，2 天传代一次。 化等作用 。实验研究表明 EGCG 能减轻紫外线诱 导的皮肤损伤，但联合 X 射线共同对皮肤细胞的作 1.3 辐照条件 用鲜有报道。本文研究了 EGCG 对皮肤细胞的辐射 防护作用及其辐射防护机制。 采用美国 RADSOURCE 公司直线加速器，剂量 率 1.15 Gy/min，射线能量 160 kV，照射细胞。克隆 1 实验材料和方法 形成实验使用的吸收剂量为 0、2 、4 、6 和 8