酵母双杂交自激活.pptVIP

酵母双杂交(自激活);真核生物的转录因子是由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成的。; GAL4分子的BD可以同上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)结合。;His, β-gal; 一般情况下，单独的 BD 可以与 GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合，但不能引起转录。然而，将一段具有转录激活活性的转录因子基因构建到BD载体上，若其表达产生的 BD 单独与 UAS 结合也可以引起下游报告基因的转录，那么就称之为酵母双杂中的自激活现象。反过来，可以利用这种自激活现象来验证某个转录因子是否具有转录激活活性。;His, β-gal;YPDA;正对照：pGAL4 负对照： pBD-GAL4;将-70℃下冻存的酵母菌在YPAD平板上划线，倒置于30℃培养2-3天。 挑取2-4个大菌落（直径2-3mm）于1.5ml YPAD液体培养基中，剧烈震荡5min，打散菌落，接种于50ml YPAD液体培养基中（250ml三角瓶），230-250转/min，30℃培养18-24hr。 取菌液测定其OD600值，需达到1.5。若不到，再培养1~2hr，若还不到，换单克隆重摇。 取50ml菌液于300mlYPAD培养基中（1-2L大三角瓶），30℃，230rpm，摇培3hr，至 OD600值为0.4~0.6。 4000rp