§6级生基微生物课件周长林第5章病毒1章节(2126KB).pptVIP

* 2 噬菌体效价测定方法—双层琼脂平板法 （1）噬菌体适当稀释 （2）地层平板（2%琼脂培养基7~8ml） （3）上层平板 噬菌体稀释液 0.1ml 对数生长期宿主菌悬液 0.2ml 0.8%琼脂培养基（55℃），3~5ml （4）37℃，8~12h （5）观察噬菌斑 * 3 噬菌体的分离 （1）对数生长期宿主细胞 （2）取样加入宿主细胞悬液，培养。 （3）稀释 （4）测PFU/ml（噬菌斑形成单位） * 噬菌体分离 可疑材料接种培养 过滤除菌 滤液（含多种噬菌体） 加指定宿主菌培养特定噬菌体 培养液变澄清-------分离噬菌体成功 溶菌空斑实验 空斑接种入相应宿主菌液培养 纯噬菌体 * 四、一步生长曲线 (one-step growth curve ) 将敏感宿主菌培养物与相应噬菌体混合一定时间，加入抗噬菌体血清消除过量的游离噬菌体。 培养后，每隔一定时间取样，接种含宿主菌平板，测定噬菌斑数。 以培养时间为横座标，以噬菌斑数为纵座标作图，绘制的曲线即噬菌体的一步生长曲线。 * 1 测定方法 （1）用噬菌体的稀释液去感染高浓度的宿主细胞（敏感菌）以保证每个细胞至多不超过一个噬菌体吸附。 （2）经数分钟吸附后，混合液中加入一定量的噬菌体的抗血清，以中和未吸附的噬菌体。 （3）用保