激光共聚焦显微镜原理培训讲解.pptxVIP

激光共聚焦显微镜原理和应用;激光扫描共聚焦显微镜 LSCMLaser scanning confocal microscope;发展历史;普通荧光显微镜和激光共聚焦显微镜图像的差别;;激光共聚焦显微镜的基本原理;LSCM的基本组成;基本结构——激光光源;激光光源的产生;扫描器系统;荧光显微镜系统;计算机系统;基本功能;组织和细胞中的荧光来源;荧光探针;如何选择探针;荧光样品的制备要求;荧光样品的制备过程;;荧光探针标记的注意事项;LSCM的优越性;同时多种物质标记 利用LSCM，通过对膜上、胞浆内多种物质的荧光标记，可以实现在同一样品上同时进行多重物质的观察，比如检测细胞内钠、钙、镁等离子浓度的比率及动态变化;瞬时分辨率高 可以实时动态观察活体组织标本。LSCM 的荧光检测器可以毫秒级或微秒级的速度检测荧光，即其时间分辨率极高，能对细胞内的分子进行功能性动态观察。LSCM技术可对活细胞在无损伤处理的情况下进行观察，跟踪活细胞内的物质或结构和生理过程随时间变化的情况，得到实时动态的连续图像。;高质量数字图像 普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度﹑相干性好等优点，可以避免普通显微镜的缺点。一般常用的气体激光器如氩(Ar)﹑氪(Kr)﹑氦(He)﹑氖(Ne)。由于LSCM的样品焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样就避免了传统光学显微镜由于光散射造成的图像信噪比降低，图像清晰度和分辨率不高的缺点。而且，LSCM的图像是以电信号的形式记录下来的，可以采用各种模拟的和数字的电子技术进行各种图像处理。;LSCM在生物医学中的应用;原位检测细胞中的核酸;荧光原位杂交（FISH）;原位检测蛋白质及其它分子;荧光蛋白：跟踪组织或细胞内基因表达及蛋白定位的标记物;检测细胞凋亡;检测细胞器;斑马鱼脑部的血管与神经元绿色：神经元红色：血管;蓝色细胞核， 绿色微管;;LSCM在生物医学中的应用;游离钙离子变化荧光探针;药物进入细胞的动态过程及定位分布;荧光漂白技术;荧光漂白丢失FLIP;荧光漂白恢复（FRAP）;荧光共振能量转移（FRET);LSCM在生物医学中的应用;激光共聚焦显微镜在各研究领域中应用;复习题;超微结构复习题;共聚焦实验分组;电镜观察分组