生物化学蛋白质课件经典案例.pptVIP

; 第一节 概 述;具体生物学意义：;三、蛋白质的组成; ; 除了上法外，还有 紫外比色法 双缩脲法  Folin—酚 考马斯亮兰G—250比色法 　　（条件：蛋白质必须是可溶的）; 第二节 氨基酸化学;不带电形式;3、常见蛋白质氨基酸的分类;(Gln, Q);2）按R的极性性质;注：二十种氨基酸的结构特点 支链氨基酸：缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸 含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸 含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、甲硫氨 酸（含硫甲基） 含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 含胍基的氨基酸：精氨酸 含咪唑基的氨基酸：组氨酸 亚氨基酸：脯氨酸 含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺 含吲哚基的氨基酸：色氨酸 含ε-氨基的氨基酸：赖氨酸;胶原蛋白中的Lys侧链氧化时能形成很强的分子间(内)交联。 Arg的胍基碱性很强，与NaOH相当。 His是一个弱碱，是天然的缓冲剂，它往往存在于许多酶的活性中心。 非极性aa一般形成蛋白质的疏水核心，带电荷的aa和极性aa位于表面。 酶的活性中心：His、Ser、Cys; ; ;6、非蛋白质氨基酸; ; ; ;在pH2.34和pH9.60处，Gly具有缓冲能力。 ? 起点： 100% Gly+ 净电荷：+1 第一拐点： 50%Gly + ，50%Gly± 平均净电荷：+0.5 pH=pK+lg[Gly±]/[Gly+] = pK1 = 2.34 第二拐点： 100%Gly± 净电荷：0 等电点pI 第三拐点： 50%Gly± ，50%Gly- 平均净电荷：-0.5 pH=pK2+lg[Gly-]/[Gly±]=pK2=9.6 终点： 100% Gly- 净电荷：-1;甘氨酸滴定曲线;; ; ;;反应要点 A.该反应由NH2与COOH共同参与 B.茚三酮是强氧化剂 C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值 D. 测定范围：0.5~50μg/ml E.脯氨酸（或羟脯氨酸）与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NH3） 应用： A.氨基酸定量分析（先用层析法分离，再测定CO2的量） B.氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。; ;氨基酸的甲醛滴定 ;小结：; (3) 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应; ;Sanger降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基氨基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用???泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Sanger法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 ; 由Edman于1950年首先提出为α- NH2的反应用于N末端分析，又称Edman降解法; ;（5）侧链R基参加的反应;重要反应：;酪氨酸的酚基在3和5位上容易发生亲电取代反应，例如发生碘化或硝化，分别生成一碘酪氨酸和二碘酪氨酸或一硝基酪氨酸和二硝基酪氨酸：;与重氮盐结合生成桔黄色的化合物：;组氨酸的侧链咪唑基与重氮苯磺酸也能形成相似的化合物，但颜色稍有差异，是棕红色。;色氨酸的侧链吲哚基在温和条件下可被N—溴代琥珀酰亚胺氧化。此反应可用于分光光度法测定蛋白质中色氨酸的含量，并能在色氨酸和酪氨酸残基处选择性化学断裂肽键。;生成的侧链带有正电荷(ε－+NH3)，它为胰蛋白酶水解肽链提供了一个新位点，这对氨基酸顺序测定是很有用的。同时此反应也可用来保护肽链上的－SH基、以防止被重新氧化为二硫键。;半胱氨酸可与二硫硝基苯甲酸(缩写为DTNB)或称Ellman氏试剂发生硫醇—二硫化物交换反应：;硫基很容易受空气或其他氧化剂氧化。 硫醇一般遇到的只有两种氧化衍生物：二硫化物和磺酸。;丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸的OH基能与酸结合成酯。在生物体蛋白质中，丝氨酸常与磷酸结合，酪蛋白中含有大量的丝氨酸磷酸酯。 ;;