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GE Healthcare 蛋白纯化技术大讲堂 1. 分子筛层析原理及应用—分享如何轻松脱盐,缓冲液交换清洗 2. 离子交换、疏水、反相层析- 分享如何纯化重组蛋白经验 3. 亲和层析原理及应用—分享如何快速纯化标签蛋白 4. 挑战性蛋白的纯化—蛋白质复性 5. ECL Plex 多重荧光蛋白印迹系统及应用 凝胶过滤(Gel filtration) 什么是凝胶过滤? 凝胶过滤（GF ）是按照分子的大小来分离混合 物的一种简单可靠的层析方法。 Gel structure A good gel for gel filtration contains about 95% water AGAROSE 空间排阻 1. Spherical particles packed into a column 2. Sample applied 3. Buffer mobile phase and sample 4. large molecules leave the column first move through column, molecules followed by smaller molecules in order diffuse in and out of matrix of size, molecules larger than the matrix pores pass straight through. Diffusion Diffusion out of the pores Buffer Buffer Diffusion into the pores 空间排阻导致较早的洗脱 按照分子大小洗脱. 大分子先洗脱出来; 小分子后洗脱 出来. 凝胶过滤原理 • 术语和定义 • 校准曲线 • 选择性和有效性 术语解释 Vo = 排阻体积/外水体积 VR = 保留体积/洗脱体积 Vt = 总液体积 Vi = 孔内体积/ 内水体积= Vc - Vs – Vo Vc = 层析柱几何体积 外水