2017_2018学年度高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定练习新人教版选修.docVIP

课题1DNA的粗提取与鉴定 DNA粗提取、分离与鉴定的原理 [自读教材·夯基础] 1．思路与方法 (1)思路：选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 (2)方法：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 2．提取DNA的原理 (1)DNA的溶解性： ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 ②DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质则溶于其中，利用这一原理可以将DNA与蛋白质进一步分离。 (2)DNA的耐受性： ①蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60～80 ℃的高温而发生变性，而DNA在80_℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 3．DNA的鉴定 DNA＋二苯胺蓝色 根据教材P54图5-1“DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线”，思考下列问题： (1)描述DNA在NaCl溶液中溶解度的变化情况。 提示：在物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度最小。在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 (2)如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 提示：用物质的量浓度高于或低于0.14 mol/L的NaCl溶液可溶解DNA，用物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液可析出DNA。 [跟随名师·解疑难] DNA的溶解度 溶解规律 2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 DNA 溶解 析出 蛋白质 NaCl溶液浓度从2 mol/L降低的过程中，蛋白质溶解度逐渐增大 部分发生盐 析沉淀 溶解 总结 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大 ②选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的 实验设计 [自读教材·夯基础] 1．过程 　　2.操作提示 (1)以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。 (2)加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂絮状，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 (3)二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定效果。 1．可否选用哺乳动物成熟红细胞作实验材料？为什么？ 提示：不可以。因为哺乳动物成熟红细胞无细胞核。 2．提取洋葱的DNA时，需在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐，并进行充分的搅拌和研磨。请思考下列问题： (1)加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 提示：洗涤剂能溶解细胞膜，释放出DNA；食盐有利于DNA的溶解。 (2)如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 提示：提取的DNA量少，导致看不到丝状沉淀物，用二苯胺试剂鉴定结果不明显等。 3．提纯时，为什么要选用体积分数为95%的冷酒精？ 提示：冷酒精提纯效果更好。 [跟随名师·解疑难] 1．实验材料的选取 (1)鸡血适宜作为实验材料的两个原因：一是因为鸡血细胞核中的DNA含量丰富，材料易得；二是因为鸡血细胞易吸水涨破。 (2)材料的处理(以鸡血为例)： 2．实验过程中的几点注意事项 (1)两次使用蒸馏水的作用：第一次用蒸馏水是使鸡血细胞吸水涨破，提取核DNA；第二次用蒸馏水稀释NaCl溶液，使DNA析出。 (2)实验中三次过滤操作的比较： 次数 过滤液 过滤后 纱布上 滤液中 1 加蒸馏水的细胞滤液 细胞膜、核膜、糖类、蛋白质等 含杂质的DNA　 2 浓度为2 mol/L的NaCl溶液 不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质 含杂质较少的DNA 3 浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液 DNA 溶于0.14 mol/L NaCl溶液的杂质 (3)用玻璃棒搅拌时，动作要缓慢且沿同一方向进行，目的是防止DNA被破坏。 (4)实验过程中最好使用塑料烧杯和试管，可减少提取过程中DNA的损失。 3．结果分析及评价 (1)现象是否明显及可能原因： 若实验结果不明显，可能的原因是： 材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。 二苯胺最好现配现用，否则二苯胺变成浅蓝