维生素E检测作业指导书.docVIP

植物油脂维生素E检验作业指导书 1.目的：规定了植物油脂中维生素E的测定。 2.适用范围：适用于植物油脂中维生素E含量的测定。 本标准检出限分别为：α-E:91.8ng;γ-E:36.6ng;δ-E:20.6ng。 3.编写依据：GB/T5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》。 4.原理：试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱将维生素E分离，经紫外检测器检测，并用外标法定量测定。 5.仪器及设备： 5.1 高效液相色谱仪（带紫外检测器） 5.2 旋转蒸发器 5.3 超声波仪 5.4 高速离心机 5.5.电热恒温水浴锅 5.6 紫外分光光度计 5.7 圆底烧瓶：150mL 5.8 烧杯：100mL 、250mL 5.9 量筒：50mL 5.10 刻度移液管：1.0mL、2.0mL、5.0mL 5.11 单标移液管：5.0mL、10.0mL 5.12 容量瓶：25mL、50mL、100mL 5.13 茄型烧瓶：250mL 5.14 梨形分液漏斗：250mL 5.15 玻璃注射器：5mL 5.16 玻璃砂芯漏斗：30mLG3 6.试剂 6.1 无水乙醚（不得含有过氧化物） 过氧化物检验方法：用5 mL无水乙醚加1 mL10%碘化钾溶液，振摇1min，若有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或滴加4滴0.5%淀粉指示剂，水层呈蓝色，则该乙醚需处理后使用。 去除过氧化物的方法：量取700mL～800mL的乙醚置于1000mL的平底烧瓶中，加入10g～15g的还原铁粉，将其摇匀，后将其静置20min，后置于30℃的恒温水浴上蒸馏，弃去10%初流液和10%残溜液。 6.2 无水乙醇（不得含有醛类物质） 醛类物质检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加少量乙醇摇匀，再加入氢氧化钠溶液，加热放置冷却后，若有银镜反应，则表示有醛类物质。 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇，将两者倾入1L乙醇中，振摇后放置暗处2天（不时摇动，促进反应）后置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初流液50mL，当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。 6.3 无水硫酸钠 6.4 抗坏血酸溶液（100g/L）：临用前配制 6.5 氢氧化钾溶液（1+1） 6.6 硝酸银溶液（50g/L） 6.7 氢氧化钠溶液（100g/L） 6.8 银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液中，直至生成的沉淀重行溶解为止，再加氢氧化钠溶液数滴，如生成沉淀，再加氨水直至溶解 6.9 维生素标准溶液：α-生育酚（纯度＞95%），γ-生育酚（纯度＞95%），δ-生育酚（纯度＞95%）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg。临用前用分光光度计分别标定此三种维生素E溶液的准确浓度。 6.10 甲醇（色谱纯） 6.11 试纸：pH1～14 7.试样处理 7.1皂化 准确称取1.0000g样品于150mL圆底烧瓶中，加入数粒沸石，加入30 mL无水乙醇，摇至油脂分散（必要时可用超声波仪将油脂分散开），加入5 mL 10%抗坏血酸溶液，摇匀，再加入10 mL氢氧化钾（1+1）溶液，摇匀，置沸水浴回流30 min使试样皂化完全，取出，立即放入冰水中冷却。 7.2提取 将皂化后的试样转入分液漏斗中，用50 mL水分三次冲洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中，用约100 mL无水乙醚分两次洗烧瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗2 min，静置分层，弃去水层。 7.3洗涤 用约50 mL水洗分液漏斗中的乙醚层，分洗3～4次（用pH试纸检验直至水层不显碱性），弃去水层。（最初水洗时轻摇，逐次振摇强度可增加）。 7.4浓缩 将乙醚提取液经过盛有无水硫酸钠（约5g）的砂芯漏斗，将滤液过滤至250 ml旋转蒸发瓶中，用80ml无水乙醚分五次洗分液漏斗，洗液并入旋转蒸发瓶中，并将其置旋转蒸发器42℃水浴回收乙醚，待瓶中剩约2mL乙醚时取下用氮气吹干，加入10mL无水乙醇，充分溶解，过0.45μm滤膜，进样，进行定量分析。 8.标准曲线的制备 8.1 维生素E 标准浓度的标定 取维生素E的标准溶液若干微升分别稀释至3.00mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如表1所示。 表1 标准 加入标准液的量 V/uL 比吸光系数 波长 λ/nm 视黄醇 α-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚 10.00 100.0 100.0 100.0 1 835 71 92.8 91.2 325 294 298 298 浓度计算按以下公式： 式中： C1——维生素浓度，单