第二章-细胞培养设施和基本条件.pptVIP

　　　　　　 第二章 　　　细胞培养设施和基本条件 细胞培养设施和基本条件 实验室设计 原则: 防止微生物污染和有害因素影响 要求: 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘 划分不同功能区并用铝合金板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室 一般包括：准备室、培养室和缓冲室 准备室： 用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。 培养室： 用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。天花板不宜高过2.5M。 缓冲室：（更衣室） 41 实验室设备 一、最常用的大型必备装置和仪器 超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、离心机、 冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波 清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等 二、最常用的培养器具 l.过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器 2.手术器械 3.培养器皿：溶液瓶、培养瓶 、培养皿、多孔培 养板、移液管和吸管、离心管 净化工作台（必备！） 根据气流的方向分为垂直流超净工作台 水平流超净工作台 根据操作结构分为:单边操作及双边操作 超净工作台使用前应用紫外灯照射30分钟。 操作最好在操作区的中心位置进行，在设计上，这是一个较安全的区域。 开启超净工作台风机并打开工作灯。 操作中严格遵守无菌操作规程。 操作结束后，要认真清理操作台面，除必备的公共物品外，其余要带离工作台。 清水擦拭后，再用75%酒精擦拭台面。 CO2培养箱： 用于维持适当温度、湿度与pH 质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过0.5度;培养箱的温度设在35～37℃，这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。 培养容器需与外界保持通气状态 箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精） 水槽:用于保持一定湿度 用途: 烘干和干热消毒玻璃器皿和 金属器械等 使用时注意: 1.鼓风与升温同时进行，100度时可停止鼓风 2.禁止先升温后鼓风 3.100度以下时再打开箱门 4.塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒 倒 置 显 微 镜 倒置显微镜(Inverted Microscope)的 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照 明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在 载物台之上，用于观察培养的活细胞，具 有相差物镜。 水纯化装置 很少使用离子交换装置处理的水 蒸馏水装置分金属和玻璃两种 洗刷装置 人工洗刷* 超声洗涤装置 玻璃吸管洗涤 正压过滤器 细胞冷冻贮存器 离心机 小型台式离心机符合分离细胞要求 加样器 器 械（取材用） 解剖刀 解剖剪 虹膜剪 镊子 注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长 培养器皿等 玻璃器皿 玻璃瓶（用于储存各种液体）: 500毫升、250毫升、100毫升 培养瓶 培养皿 吸管:弯头和直头两种 带盖离心管 塑料瓶皿 多孔培养板 4、6、24、96孔 培养皿 30、60、100毫米 培养瓶 * * 缓冲室 专用培养实验室布局示意图 普通细胞培养室内走廊 宽敞的细胞培养区 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 要注意检查是否堵塞！（看酒精灯） 超净工作台结构和模式图 超净工作台的使用及注意事项: 二氧化碳培养箱 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时 应注意的问题： 1.用螺旋口瓶培养细胞时，需 将瓶盖微松，以保证通气 2.保持培养箱内空气干净 3.箱内用无菌蒸馏水保持箱内 湿度 4.不宜长时间将门打开 5.器械和手的消毒 电热恒温鼓风干燥箱 高压灭菌锅 学生正在进行细胞观察 倒置显微镜 倒置显微镜 自动双重纯水蒸馏器 超纯水仪 超声波清洗机 不锈钢正压过滤器 离心机 液氮罐 Operation of Micropipette 1、select suitable pipette and tips according to the desired volume 2、set the volume 3、extracting the solution through pushing button to position 1 4、releasing through pushing to bottom 磁力搅拌器 精密pH计 微孔板震荡器 *