超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定大鼠粪便中盐酸小檗碱含量.pdfVIP

超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定大鼠粪便中盐酸小檗碱含量 摘要：建立一种同时测定大鼠粪便中的盐酸小檗碱的超高效液相色谱串联质谱法 （UHPLC-MS/MS ）并用于考察灌胃给予大鼠盐酸小檗碱药代动力学情况。样品经处理后， 用超高效液相色谱LC-30A快速分离盐酸小檗碱三重四极杆质谱仪LCMS-8040进行定量分析。 -1 -1 使用内标法在10 ng·mL ~1000 ng·mL 浓度范围内绘制校准曲线，线性良好，相关系数为 0.9985 。对高、中、低三浓度生物样品进行批次内、批次间精密度考察，RSD%在19.38以下， 符合SFDA报批要求。 关键词：盐酸小檗碱 药物代谢动力学 超高效液相色谱串联质谱法 前言： 小檗碱（结构式如图 1）是一种异喹啉类生物碱，是从毛莨科黄连属植物黄连的根状茎中提 取的主要有效成分，具有广谱抗菌作用，临床上一般使用其盐酸盐治疗肠道感染与腹泻。 Weijia Kong 等人 2004 年报道小檗碱具有降血脂作用。动物实验及细胞实验同样证明小檗碱 t 在降脂方面效果显著。通过进一步的机制研究发现小檗碱的降脂原理与他汀类药物并不相同： 他汀类药物是通过增加 LDLR mRNA 的转录来降低血脂，而小檗碱则是通过稳定LDLR mRNA 从而增加 LDL 受体的表达来降低胆固醇，已达到降血脂的目的。临床发现，小檗碱 f 在血浆中的极低浓度即可产生药理活性。因此利用高效液相色谱-三重四级杆质谱 （LC-MS/MS ）联用技术，我们建立了一种准确、快速、灵敏的小檗碱定量方法。 a 图 1 盐酸小檗碱结构式 1.实验部分 r 1.1 药物 盐酸小檗碱购自 JK Scientific Ltd ，内标巴马汀购自中国食品药品检定研究院，纯度均 大于 98% 。 1.2 动物 SD 雄性大鼠（SPF 级），250~290 g ，购买于中国食品药品检定研究院实验动物资源中 D 心，合格证号 SCXK （京）2009-0017 ；实验前大鼠 12 h 禁食，但自由饮水。 1.3 仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四极杆质谱仪LCMS-8040 联用系统。 具体配置为 LC-30AD×2 输液泵，DGU-20A5 在线脱气机，SIL-30AC 自动进样器，CTO-30A 柱温箱，CBM-20A 系统控制器，LCMS-8040 三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.53 色 谱工作站；AG-135 电子天平（瑞士Mettler 公司）；XW-80A 型微型漩涡混合仪（金坛市盛 蓝仪器制造有限公司）；TH2-100 型恒温培养摇床（上海一恒科技有限公司）；氮气吹扫仪 MD200-2 （杭州奥盛仪器有限公司）；Heraeus Pico 21 离心机（Thermo Scientfic，德国）。 65    1.4 试剂 乙腈购自美国Fisher 公司（Fairlawn ，NJ ，USA ）；实验用水由Milli-Q Plus 水净化系统 （Millipore ，Ltd. ）经去离子与二次净化制得；甲酸（纯度99%，LCMS 级，Wako, Japan ）； 其余试剂均为分析纯，购自北京化学试剂公司。 3 方法和结果 2.1 对照品溶液及内标溶液的配制 精密称取 5 mg 盐酸小檗碱对照品，置于 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成 100 -1 μg·mL 的对照品储备液，从中取出 100 μL