第三章发酵工程与食品产业-微生物灭菌.pptVIP

第三节 培养基的灭菌 在工业微生物培养过程中，只允许生产菌存在和生长繁殖，不允许其它微生物共存，因此所有发酵过程，必须进行纯种培养 整个发酵过程必须牢固树立无菌观念，强调无菌操作 除了设备应严格按规定保证没有死角，没有构成染菌可能的因素外，必须对培养基和生产环境进行严格的灭菌和消毒，防止杂菌和噬菌体的污染 灭菌：利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。 消毒：用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽胞。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到消毒的目的。 在发酵工业生产中，为了保证纯种培养，在生产菌种接种培养前，要对培养基、空气系统、消泡剂、流加物料、设备、管道等进行灭菌，还要对生产环境进行消毒，防止杂菌和噬菌体的大量繁殖。 只有不受杂菌污染，发酵过程才能正常进行。 干热灭菌法 火焰灭菌法 电磁波、射线灭菌法 湿热灭菌法（主要是高压蒸汽灭菌） 化学药剂灭菌法 过滤除菌法 过滤除菌法 将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。在体外培养时，过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。 缺点:无法去除其中的病毒和噬菌体 思考 在高压蒸汽灭菌法中需不需要排除设备中的空气？ 75%乙醇与无水乙醇相比哪个杀菌能力更强？为什么？ 灭菌时间取决于污染的程度（N0）、灭菌的程度（残留菌数Nt）和k值。 在培养基灭菌的过程中，除微生物被杀死外，还伴随着营养成分的破坏，如糖液焦化变色、蛋白质变性、维生素失活、醛基和氨基反应、不饱和醛聚合、一些化合物发生水解等。因此，必须选择一个既能达到灭菌的目的，又能使培养基中营养成分破坏至最小的灭菌工艺条件。 灭菌温度较高而时间较短，要比温度较低时间较长效果好。 对同样的培养基进行126～132℃、5～7min连续灭菌，其所得培养基质量要比采用120℃、30min的实罐灭菌好，可以得到较高的发酵水平； 对同一类培养基进行120℃、20min的实罐灭菌，其所得培养基的发酵水平高于120℃、30min的对照，而同样达到灭菌的要求。 手提式 立式 连续灭菌采用连消塔时，可在20～30s达到预定灭菌温度，由维持罐来保持必需的杀菌时间。 采用喷射杀菌设备，蒸汽直接喷入生培养液，温度几乎立即上升到预定杀菌温度，由保温段管子的长度来保证必要的杀菌时间。 采用板式换热器，可在20s内达到杀菌温度，经保温保持必要的杀菌时间，然后再板式热交换器另一段20s内冷却到发酵温度。 间歇灭菌即实消，是在每批培养基全部流入发酵罐后，就在罐内通入蒸汽加热至灭菌温度，维持一定时间，将发酵罐和培养基同时灭菌，再冷却到接种温度备用。 其它灭菌设备一般采用蒸汽灭菌，如设备十分耐压，则可采用较高温度，但必须注意设备内部的凹处及露出的小配管等蒸汽不能到达的部位。 有些设备也可采用SO2熏蒸灭菌，如葡萄酒发酵池、罐等。 蒸煮灭菌，但固体培养基呈粒状、片状或粉状，流动性差，不易翻动，吸水加热易成团，冷却困难。 针对这些特点设计的转鼓式灭菌机常用于酒厂、罐等。 培养基成分 pH值 培养基中的颗粒 泡沫 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质增加微生物的耐热性，高浓度有机物会包于细胞周围形成一层薄膜，影响热的传递； 因此，在固形物含量高的情况下，灭菌温度可高些。 pH值对微生物的耐热性影响很大。 pH值6.0～8.0，微生物最耐热； pH值6.0，氢离子易渗入微生物细胞内，从而改变细胞的生理反应促使其死亡。 所以，pH值愈低，灭菌所需的时间愈短。 培养基中的颗粒小，灭菌容易；颗粒大，灭菌难。 一般含有1mm的颗粒对培养基灭菌影响不大，但颗粒大时，影响灭菌效果，应过滤除去。 培养基的泡沫对灭菌极为不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使传热困难，热难穿透过去杀灭微生物。 对易产生泡沫的培养基在灭菌时，可加入少量消泡剂。 对有泡沫的培养基进行连续灭菌时更应注意。 灭菌锅内灭菌 种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的空罐灭菌及管道灭菌 空气总过滤器和分过滤器灭菌 * 一、灭菌的方法 进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，氧化作用导致微生物死亡是主要依据。 由于微生物对于热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170℃、1～1.5h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。 利用火焰直接杀死微生物的灭菌法称为火焰灭菌法。该法方法简单，灭菌彻底，但使用范围有限，仅适用于接种针、玻璃棒、三角瓶口等的灭菌。 利用电磁波、紫外线、X射线、γ射线或放射性物质产生的高能粒子进行灭菌，以紫外线最常用。 紫外线对芽胞和营养细胞都能起作用，但细菌芽胞和霉菌孢子对