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蛋白印迹成功指南 源自 Cell Signaling TeChnology | WB 蛋白印迹技术是阐释生物过程和疾病背后复杂信号事件的强有力工具。本文重点阐述了蛋白印迹操作 流程中的关键步骤，并展示了操作流程变化对您最终印迹结果的影响。 简介 蛋白印迹也称作免疫印迹，是一种被广泛应用并得到公认的技术，用于 检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。这一技术利用抗体与特定待 检测蛋白的结合，测定生物样本中的蛋白水平。抗体与其靶点蛋白表位 的精确结合可用于检测蛋白质中具有高度特异性的氨基酸序列。抗体也 可检测蛋白质的特异性翻译后修饰（PTM）。磷酸化特异性抗体已用于确 定特定信号通路组分以及研究在不同生物学背景下磷酸化事件的变化。  最近研发出了针对其他 PTM 的特异性抗体。这使得研究人员可以监控蛋 白质乙酰化、甲基化或泛素化状态的变化。 Cell Signaling Technology （CST）的科学家每天进行一千多次免疫印迹实验以 验证我们现有和新的抗体。过去十多年我们一直对免疫印迹操作流程进 行优化，您可以参阅第13页，也可以在线阅读（见下面链接）。这样您 可以重复这一过程并得到可重复且可靠的结果。 在此，我们将重点讲述蛋白印迹操作流程中的关键步骤，并展示操作流 程变化对您最终印迹结果的影响。我们还将讨论在您的免疫印迹试验中 使用经严格验证抗体的重要性。最后，我们将提供CST科学家常用且最适 用于与抗体配套使用的试剂清单。 蛋白印迹技术是了解生物过程和疾病背后  复杂信号事件的强有力工具。 /WBProtocol 2 1 10步实现更好的 + + + + homogenous tissue or cells solution WB实验结果 在此，本文概述了我们所推荐的操作步骤，并讨论成功实验的关键步骤。根据我们在免疫 样品制备 印迹方面的丰富经验，作为我们验证、批次测试和技术支持流程的一部分，我们将给出试 裂解缓冲液和超声处理 = 剂和实验过程的建议。尽管免疫印迹技术被广泛应用和认可，但是仍会出现问题导致出现 更好的释放出蛋白 次优结果，这可能会耗费时间且令人沮丧。本文旨在通过提供建议，帮助您在最短的时 间、以最少的终端用户优化调整得到预期结果，提升免疫印迹效果。 2 3 4 5 SDS湿转移 封闭 一抗孵育 在适当的条件下电泳 至硝酸纤维素膜 在含5%牛奶的 TBST 中 在4℃、含5% BSA 或脱脂牛奶* 的 TBST 中孵育过夜