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实验四 NK细胞活性测定（MTT比色法） 脾脏是重要的免疫器官，内含T细胞、B细胞、NK细胞及巨噬细胞等多种免疫细胞。 NK细胞在杀伤靶细胞时既不需要特异性抗体参与，也不需要抗原预先致敏的淋巴细胞。在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用。 原理： 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶使外源性黄色的MTT还原成蓝紫色的Formazan结晶，并沉积在细胞里。而死细胞无此功能。 处死小鼠，消毒取脾，去除结缔组织和脂肪组织，放入平皿（3ml Hanks液）; 轻轻拉碎脾组织，制成脾细胞悬液，过200目滤网制成单细胞悬液; 离心（1500转/分 5min），弃去上清; 用Hanks液洗涤1次(加入3ml Hanks液，混匀， 1500转/分 5min，去上清)，加入1ml 1640培养液，混匀； 细胞计数：取细胞悬液20微升，加到含有780微升白细胞稀释液的Eppendorf管中，混匀，取20ul细胞悬液，加入计数板中。在显微镜下计数，根据p53公示计算细胞数量。 根据细胞数量，用1640完全培养基配成2×106/ml浓度的细胞悬液。 1、小鼠脾细胞悬液的制备： 2、靶细胞的制备（实验员准备）： 取对数生长期YAC-1细胞， Hanks液洗涤2次，计数，调整至2×105/ml。 3、细胞毒试验： 实验组 靶细胞对照组 效应细胞对照组 空白组 靶细胞 100μl 100μl － － 效应细胞 100μl － 100μl － 1640培养基 － 100μl 100μl 200μl 4、孵育 二氧化碳培养箱孵育2小时； 加10μl MTT，继续孵育2－3小时。 5、测OD值 弃上清，加150μl 二甲亚砜，振荡10min，测OD值。 （1- 实验组OD值 - 效应细胞对照组OD值 靶细胞对照组OD值 ）×100% NK细胞活性（%）= 6、结果分析
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