适合杨树叶片蛋白质组学样品制备方法的比较.PDF

第４２卷　 第２期 南京林业大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．４２，Ｎｏ．２ ２０１８年３月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｒ．，２０１８ － ＤＯＩ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００ ２００６．２０１７０６０６３ 适合杨树叶片蛋白质组学样品制备方法的比较 甄　 艳，郑秀化，施季森* （南方现代林业协同创新中心，林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室， 南京林业大学林学院，江苏　 南京　 ２１００３７） 摘要：【目的】为了提高植物叶片中低丰度蛋白质的检测效率，建立有效的杨树叶片蛋白质组学分析的蛋白质提 取方法。 【方法】利用三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ分级提取方法和ＳＤＳ⁃酚结合ＰＥＧ分级提取方法对杨树叶片蛋白 质进行提取，并采用ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ和双向凝胶电泳（２⁃ＤＥ）对提取结果进行评价。 【结果】ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 实验结果显 示，三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ方法优于ＳＤＳ⁃酚结合ＰＥＧ分级方法。 三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ分级和非结合ＰＥＧ 分级提取蛋白质的双向电泳结果表明，ＰＥＧ 分级能有效地去除高丰度蛋白质Ｒｕｂｉｓｃｏ，提高低丰度蛋白质的检 测。 三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ分级法检测的蛋白质比非结合ＰＥＧ分级法多９０个蛋白质点。 【结论】以ＬＴＱ⁃Ｏｒ⁃ ｂｉｔｒａｐ ＸＬ分析三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ分级分离的一些蛋白质显示，三氯乙酸⁃丙酮结合ＰＥＧ分级对于２⁃ＤＥ和 ＭＳ鉴定低丰度蛋白质是一种有效的分离方法。 关键词：核酮糖⁃１，５⁃二磷酸羧化⁃加氧酶；聚乙二醇分级；杨树叶片；双向电泳 － － － 中图分类号：Ｓ７９２１１　 　 　 　 　 　 　 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００ ２００６（２０１８）０２ ００３３ ０７ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｐｏｐｌａｒ ｌｅａｆ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ＺＨＥＮ Ｙａｎ，ＺＨＥＮＧ Ｘｉｕｈｕａ，ＳＨＩ Ｊｉｓｅｎ∗ （Ｃｏ⁃ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｌｅａｖｅｓ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｔｒａｃ⁃ ｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｐｏｐｌａｒ ｌｅａｖｅｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】 Ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ （ＴＣＡ）⁃ａｃｅｔｏｎｅ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ （ＰＥＧ）ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎａｎｄｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ （ＳＤＳ）⁃ｐｈｅｎｏｌｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰＥＧｆｒａｃ⁃ ｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ，ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈ ＳＤＳ⁃ｐｏ