agef1在线虫胞吞作用中的功能研究 word格式.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要?胞吞作用是一种囊泡介导的生物途径。细胞无论是从外界环境中吸收营养物质还是更新膜脂膜蛋白，都要依赖于胞吞作用。虽然已经明确了很多蛋白，例如RabGTP酶，在胞吞作用中起到了至关重要的作用，但是对于胞吞作用调控的详细机制研究的并不透彻。大部分研究都集中在胞吞的早期进程，对于胞吞的晚期进程，尤其是溶酶体相关进程还鲜有研究。溶酶体命运的研究不仅对揭示溶酶体相关动力学的调控机制，更对揭示胞吞作用的调控网络具有非常重要的意义。本文利用模式生物秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）对受体介导胞吞作用中的重要调控蛋白AGEF-1的作用机制做了进一步研究，克服了AGEF-1缺失后线虫表现为胚胎致死以及发育停滞不能用于深入研究的难题，利用胚胎后RNAi的方法，在腔胞胞吞作用研究模型中深入研究了AGEF-1对胞吞途径的影响，揭示了AGEF-1在胞吞途径中的新作用。在线虫中AGEF-1调控卵母细胞对卵黄蛋白的吸收并通过其GEF活性，调控ARF-1/3的活性，影响卵母细胞发育过程中caveolin-1的形成。但迄今为止，AGEF-1的亚细胞定位以及调控胞吞作用的详细机制并不清楚。我们应用含有大量标记的腔胞胞吞作用研究模型，发现AGEF-1的缺失不仅严重影响腔胞对肌肉细胞分泌到假体腔中的可溶性蛋白GFP的吸收，而且腔胞中溶酶体的体积明显增大。进一步研究发现，溶酶体的酸性环境并未改变，水溶性物质胞吞后运输至溶酶体的途径正常，溶酶体的降解功能依然存在，揭示了AGEF-1调控溶酶体的分离/融合过程，但并不调控溶酶体的功能。本的研资究助课。题得到国家重点基础研究发展计划和国家自然科学基金基因上位分析表明，AGEF-1处于ARL-8蛋白的上游调控内吞的早期过程，又处于ARL-8的下游调控物质向溶酶体的运输以及溶酶体的融合/分离过程。细胞亚定位结果显示AGEF-1定位于溶酶体膜上，表明AGEF-1直接调控着溶酶体相关动力学。对内吞作用早期步骤标记的研究发现AGEF-1在质膜附近调控Clathrin的分布直?*(2007CB914203, 2007CB714507)接调控腔胞对液相物质的内吞。并通过蛋白过表达以及分段蛋白过表达进一步证明了AGEF-1 通过结合不同的蛋白或者蛋白复合物调控腔胞内吞液相物质的能力以及腔胞溶酶体形态两个独立事件，且AGEF-1并不依赖ARF-1/3活性调控溶酶体的形态。总而言之，本论文发现了调控溶酶体融合/分离动力学过程的第一个GTP 酶调控因子，对进一步全面深入了解溶酶体相关调控的详细机制以及胞吞作用的整合调控网络具有重要的推动作用。此外AGEF-1 在其他组织器官中的功能研究发现，AGEF-1在神经系统中通过调节Clathrin的分布调控神经系统的活性。行为学分析发现AGEF-1 缺失后，线虫的爬行速率变慢，泳动速率却变快，揭示了这两种运动行为很可能是由不同的神经环路所控制，为研究Clathrin 介导的胞吞作用在神经活动中的功能提供了良好的模型。关键词：秀丽隐杆线虫胞吞作用ARFARF-GEFAGEF-1ARL-8网格蛋白?AbstractTheendocyticpathwayisavesicle-mediatedprocessrequiredforvariousessentialcellularfunctions,includingprocessingfluidandmacromoleculesfromtheoutsideenvironment,andinternalizingplasmamembranelipidsandproteins.Althoughmuchisknownabouthowsomecellularproteins,suchasRabGTPases,regulatesomestepsoftheendocyticpathway