gnas基因突变在颌骨骨纤维异常增殖症鉴别诊断中作用及其致病机制初探 word格式.docx

生1）收集骨纤维异常增殖症患者和颌骨整形患者的松质骨（作为骨纤维异常增 殖症患者的正常对照），原代培养其骨髓间质细胞；2）采用 real time PCR 方法检测成骨细胞相关分子的表达，比较正常骨髓间质 细胞和骨纤维异常增殖症病变细胞成骨能力的差异；3）以正常骨髓间质细胞作为对照，采用 real time PCR 和 Western blotting 的方 法检测骨纤维异常增殖症病变细胞中 Gli2 的表达；4）在正常骨髓间质细胞中用慢病毒 shRNA 沉默 Gli2，检测沉默对骨髓间质细 胞成骨细胞相关分子表达的影响；5）对比沉默 Gli2 后骨髓间质细胞与骨纤维异常增殖症病变细胞成骨细胞相关 分子的表达，寻找 Gli2 参与骨纤维异常增殖症发病机制的线索；6）采用 PKA 抑制剂 H89 刺激正常的骨髓间质细胞，检测 Gli2 的表达变化， 寻找骨髓间质细胞中 Gli2 的上游调控基因。研究结果1. 按照 2005 年 WHO 头颈部肿瘤分类的标准，共有 30 例颌骨骨纤维异常增殖 症和 21 例骨化纤维瘤患者被纳入实验，对其进行常规 PCR 并直接测序后发 现，在 30 例骨纤维异常增殖症中 27 例有突变，突变率为 90%，21 例骨化纤 维瘤中均未检出突变。2. Meta 分析的结果进一步支持我们的实验结果，以往文献报道中的 307 例骨纤维异常增殖症中 246 例有突变，突变率为 86%，而在 23 例骨化纤维瘤中均未 有突变的报道。3. 第二部分研究共收集颌骨骨纤维异常增殖症病变细胞 19 例，正常颌骨骨髓间质细胞 7 例。GNAS 基因突变检测显示 19 例骨纤维异常增殖症病变细胞中 18 例有此基因的突变，且突变位点均位于 8 号外显子，1 例骨纤维异常增殖症 患者和 7 例正常骨髓间质细胞中未检出突变。4. 与正常骨髓间质细胞相比，骨纤维异常增殖症病变细胞部分成骨细胞相关分 子的表达发生了改变，其中 ATF4、MSX2 和 BSP 的表达下调，SATB2 的表 达上调；RUNX2 和 TWIST1 的表达未发生明显改变，转录因子 OSX 的表达 未被检测到；对细胞进行成骨诱导后发现，与正常对照相比，骨纤维异常增殖症病变细胞的 AKP 活性较低，且其形成钙化结节的能力也降低。5.与正常骨髓间质细胞相比，骨纤维异常增殖症病变细胞中 Gli2 的表达下调。6. 用 shRNA 沉默正常骨髓间质细胞中的 Gli2 后，成骨细胞相关分子 RUNX2、 TWIST1、ATF4、MSX2、SATB2、OCN 等的表达受到了抑制，BSP 分子的 表达无显著变化，转录因子 OSX 的表达未被检测到；对沉默后的细胞进行成 骨诱导，与阴性对照相比，沉默组 AKP 的活性较低。7. 采用 H89 抑制骨髓间质细胞中 PKA 的活性后，细胞内 Gli2 的表达上调。 结论1．常规 PCR 并直接测序检测 GNAS 基因的 8 号外显子和 9 号外显子的方法可作 为颌骨骨纤维异常增殖症和骨化纤维瘤鉴别诊断的辅助工具，此方法的操作 简单，特异性好，在常规临床诊断中具有较好的应用前景。2. 与正常骨髓间质细胞相比，骨纤维异常增殖症病变细胞的成骨能力下降，表 现为 AKP 活性降低和矿化能力减弱，另外，本研究还首次揭示 ATF4、MSX2 在骨纤维异常增殖症中表达下调，STAB2 的表达上调，TWIST1 的表达未发 生显著改变。上述分子均是调控成骨细胞分化的关键转录因子。3．本研究表明转录因子Gli2可能参与了骨纤维异常增殖症的异常成骨过程。Gli2 在 骨 纤 维 异 常 增 殖 症 中 的 表 达 受 到 了 抑 制 ， 而 且 这 种 抑 制 作 用 可能 与 cAMP-PKA活性升高有关。另外，体外实验显示Gli2基因的沉默可降低AKP 的活性，下调RUNX2、TWIST1、ATF4、MSX2、STAB2、OCN等成骨细胞 相关分子的表达。4. 通过对比Gli2沉默后正常骨髓间质细胞与骨纤维异常增殖症病变细胞成骨细 胞相关分子的表达，我们推测Gli2可能通过影响ATF4、MSX2分子的表达和 AKP的活性参与骨纤维异常增殖症的异常成骨分化过程。【关键词】骨纤维异常增殖症；GNAS；鉴别诊断；Gli2；骨化纤维瘤The Role of GNAS Mutation in Diffrential Diagnosis andPathogenesis of Fibrous Dysplasia of the JawsPh.D Candidate：Rui-Rui Shi Directed by：Prof. Tie-Jun Li Department of Oral PathologyPeking University School and H